JORNADAS CNA 2021 - Agencia Española de ...
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María Jesús Zamora Escribano
Jefe de Servicio de Microbiología Alimentaria
Centro Nacional de Alimentación
Agencia Española de Consumo, Seguridad Alimentaria y
Nutrición
mzamorae@aesan.gob.es
JORNADAS CNA 2021
Redes de laboratorios
Campylobacter NATIONAL VETERINARY INSTITUTE UPPSALAE.
Food borne viruses Livsmedelsverket Uppsala
Coagulase Positive Staphylococci (CPS) ANSES Laboratorios de referencia
Antimicrobial Resistance (AMR) DTU de la Unión Europea
Listeria monocytogenes ANSES
Salmonella RIVM
E. coli /STEC ISS
Parasites ISS
CNA
Laboratorio Nacional de Laboratorios control oficial
Referencia Comunidades Autónomas
(Centro Nacional
de Alimentación)
Sonia Aguayo Balsas
Rosario Calderón Pascual
Joaquín Calvo Menocal
Raquel Cobo Gómez
Ana Dueñas Velarde
Isabel Elías Vinuesa
Jesús González Pizarro
Carmen González Sancho
Sonia González Crespos
Mercedes Klett Mingo
Sofía Mena Rodríguez
Juan Olmedo Mendicoague
Teresa Rodriguez Torrecilla
Ana Sisó Nadal
Milagros Torremocha Lázaro
Iria Uhía Castro
María Jesús Zamora Escribano
CONTENIDO
1. Organización de ejercicios de intercomparación en el
servicio de Microbiología
2. Ejercicio de intercomparación para la validación de tres
métodos de PCR. Norma ISO 10272 método horizontal
para la detección de Campylobacter spp
3. Resistencias: Decisión 2020/1729
CONTENIDO
1. Organización de ejercicios de intercomparación en el
servicio de Microbiología
2. Ejercicio de intercomparación para la validación de tres
métodos de PCR. Norma ISO 10272 método horizontal
para la detección de Campylobacter spp
3. Resistencias: Decisión 2020/1729
Reglamento 625/2017
Laboratorio Nacional de Referencia
Organización de ensayos de intercomparación
“Los laboratorios nacionales de referencia, en su
ámbito de competencia, cuando proceda,
organizarán ensayos interlaboratorios comparados
o ensayos de aptitud entre los laboratorios oficiales,
garantizarán un seguimiento apropiado de dichos
ensayos e informarán a las autoridades
competentes de los resultados de dichos controles y
seguimiento”
Ejercicios de intercomparación 2020/2021
Organización de ejercicios de intercomparación en el Servicio de
Microbiología 2020
Nº DE
FECHA
MÉTODO LABORATORIOS/
ANALITO MATRICES REALIZACIÓ
CCAA
N
PARTICIPANTES
Norma ISO 18743
Detección de triquina Carne Método de Octubre 32/17
Reglamento
Método de digestión
Detección de Anisakis Pescado Octubre 14/10
enzimática
Producto cárnico Detección de
Detección de Salmonella spp listo para Salmonella spp Norma Septiembre 47/15
consumo ISO 6579-1
Recuento de
Recuento de estafilococos estafilococos
Camarones Septiembre 38/15
coagulasa-positivos coagulasa-positivos
Normas 6888 1 y 2
Producto cárnico Recuento de Listeria
Recuento de Listeria 37/15
listo para monocytogenes ISO Octubre
monocytogenes Pendiente informe
consumo 11290-2
Producto cárnico Método de Referencia
Investigación de toxina
listo para LR UE Octubre 16/9
estafilocócica
consumo Norma ISO 19020
Ejercicios de intercomparación 2020/2021
Organización de ejercicios de intercomparación en el Servicio de Microbiología 2021
Nº DE LABORATORIOS/
MÉTODO
ANALITO MATRICES FECHA REALIZACIÓN CCAA PARTICIPANTES
ESTIMADOS
Norma ISO 18743
Detección de triquina Carne Método de Reglamento Junio 2021 32/17
Método de digestión
Detección de Anisakis Pescado Junio 2021 14/10
enzimática
Producto cárnico Recuento de Listeria
Detección de Listeria 2021 Sin fecha
listo para monocytogenes ISO 37/15
monocytogenes
consumo 11290-2
Método de Referencia
Investigación de toxina Producto de la 2021 Sin fecha
LR UE 16/9
estafilocócica pesca. Atún
Norma ISO 19020
2021 Sin fecha
Recuento de E.col por NMP Molusco Norma ISO 16649-3 33/9
Ejercicios de intercomparación Art. 35 de la Ley 17/2011, de Seguridad Alimentaria y Nutrición “Se creará la Red de Laboratorios de Seguridad Alimentaria (RELSA), para compartir y fomentar la acreditación de laboratorios de ensayo y métodos analíticos para el control oficial. Formarán parte de la dicha red los laboratorios, públicos o privados, que participen en trabajos de control oficial por designación de las autoridades competentes de las comunidades autónomas o de la Administración General del Estado. Las distintas autoridades competentes deberán facilitar a ésta última la información relativa a dichos laboratorios y su cartera de servicios. RELSA A PARTIR DE 2022 SERÁ ÚNICO LISTADO VÁLIDO DE LABORATORIOS PARA PARTICIPAR EN LOS EJERCICIOS DE INTERCOMPARACIÓN
Reglamento 625/2017 (Art.40) Excepciones a la condición de acreditación obligatoria para determinados laboratorios oficiales A los laboratorios: cuya única actividad consista en la detección de triquinas en la carne; que participen regularmente y con resultados satisfactorios en los ensayos interlaboratorios comparados o en los ensayos de aptitud organizados por los laboratorios nacionales de referencia para los métodos que los laboratorios oficiales utilicen para la detección de triquinas.
Organización ejercicios de intercomparación
EJERCICIOS DE INTERCOMPARACIÓN
COORDINADOS CNA/ LABORATORIOS
DESIGNADOS
UNIFORMIDAD Y ARMONIZACIÓN
Documentación
Codificación
Calendario
Carga de las muestras
Criterios de evaluación
Código Carga de
Nombre del Código de
del larvas en
matadero la muestra
matadero la muestra
HU 20001 0
MATADERO 1 1 CCAA HU 20002 X
HU 20003 XX
HU 20004 X
MATADERO 2 2 CCAA HU 20005 0
HU 20006 XX
HU20007 0
MATADERO 3 3 CCAA HU 20008 XX
HU 20009 XOrganización ejercicios de intercomparación ENSAYOS DE INTERCOMPARACIÓN LABORATORIOS SATÉLITES 2021 El programa de ensayos de intercomparación para laboratorios satélites correspondiente al año 2021 es el siguiente: Ronda 1: Semana del 22 al 26 de febrero de 2021 Ronda 2: Semana del 24 al 28 de mayo de 2021 Ronda 3: Semana del 4 al 8 de octubre de 2021 Ronda 4: Semana del 15 al 19 de noviembre de 2021
Organización ejercicios de intercomparación
Tabla 3: Participación en los E.I. satélites por Comunidad Autónoma
Número de
Laboratorios supervisores designados para control de satélites por
laboratorios satélites de triquina Ronda
Laboratorio feb-21 may-21
Andalucía Laboratorio de Salud Pública de Jaén 13
Andalucía Laboratorio de Salud Pública de Huelva 2
Centro de Investigación y Tecnología agroalimentaria de
2 3
Aragón Aragón
Aragón Laboratorio de Salud Pública del Gobierno de Aragón 7 7
Asturias Laboratorio de Salud Pública del Principado de Asturias 5
C y León Laboratorio de Salud Pública de Salamanca 9
CL Mancha Laboratorio de Salud Pública Talavera de la Reina 10
Extremadura Laboratorio de Salud Pública de Badajoz 2
Galicia Servicio Gallego de Salud, Lugo 9 10
Navarra Instituto de Salud Pública y Laboral de Navarra 4 3
CECAV (Centro de Calidad avícola y alimentación animal
5
Valencia de la comunidad valenciana
Total 27 64Organización ejercicios de intercomparación Otras actividades El CNA ha elaborado una guía sobre el procedimiento de carga de muestras con larvas de triquina para facilitar a los laboratorios supervisores la preparación de las muestras de los ensayos de intercomparación.
CONTENIDO
1. Organización de ejercicios de intercomparación en el
servicio de Microbiología
2. Ejercicio de intercomparación para la validación de tres
métodos de PCR. Norma ISO 10272 método horizontal
para la detección de Campylobacter spp
3. Resistencias: Decisión 2020/1729Ejercicio de intercomparación para la validación de tres métodos de PCR
Microbiology of the food chain -- Horizontal method for detection
and enumeration of Campylobacter spp. -- Part 1: Detection method
and Part 2: Colony-count technique (ISO 10272-1:2017). Punto 9,5,1
De forma alternativa o adicional a los análisis de confirmación e
identificación se pueden utilizar otras análisis (PCR, serología,
MALDITOF-MS ..) Norma ISO 7218.
C.jejuni
Hipurato negativoEjercicio de intercomparación para la validación de tres métodos de PCR LR UE de Campylobacter ha organizado un EI con objeto de incluir en la Norma ISO 10272 la PCR como método para la confirmación/identificación de las especies de Campylobacter.termotolerantes. Para el estudio se han diseñado tres PCRs 1º PCR múltiplex TIEMPO REAL, detecta Campylobacter termotolerantes (fragmento 16s rRNA) Detecta: Campylobacter coli, lari y jejuni. 2º PCR múltiplex, detecta Campylobacter: Campylobacter no termotolerantes (fragmento 23s rRNA) y también emplea primers específicos para las especies de Campylobacter coli, jejuni lari y upsaliensis 3º PCR múltiplex TIEMPO REAL detecta Campylobacter termoresistentes (primers de genes específicos e cada especie) Detecta: Campylobacter coli, lari y jejuni
Ejercicio de intercomparación para la validación de tres métodos de PCR CALENDARIO 17 de mayo envío de 50 cepas con presencia de los genes diana o no 18 de junio envío de los resultados 20 de agosto el estudio se dará por finalizado. CARACTERÍSTICAS GENERALES PCR 1 se estudian 24 cepas (1-24) PCR 2 y PCR 3 se estudian 50 cepas (1-50) Todas las cepas de estudio se analizan en paralelo realizando las pruebas bioquímicas indicadas en los puntos 9.5 y 9.6 de la Norma 10272-1:2017.(medios y reactivos según Norma). Controles de cepas positivas, negativas y controles internos de amplificación. Las cepas se reciben liofilizadas y se añade 1 ml de APT para reconstituirlas. Se siembran en agar no selectivo y se incubar a 41,5 °C durante 24-48 h. Para la confirmación bioquímica se siembran en agar no selectivo, previamente se confirmó en medio CCDA su pureza, según los puntos 9.5 y 9.6 de la Norma ISO 10272-1-2017.
Ejercicio de intercomparación para la validación de tres métodos de PCR Método PCR PASOS Extracción del ácido nucleico. • Lisis de una suspensión de colonia calentando 15 min a 95°C. • Centrifugación 3 min < 10.000g y recuperación del sobrenadante, donde se encuentra el ADN. • Hacer dilución 1/100 de la suspensión en agua DEPC estéril. PCR Preparación de reactivos a las concentraciones indicadas en el protocolo Preparar dos placas, una por cada PCR y fijar en el termociclador las condiciones específicas de cada ensayo.
Ejercicio de intercomparación para la validación de tres métodos de PCR CNA adicionalmente se ha realizado paralelamente el estudio de las cepas por el sistema automatizado BAX. Las colonias se han analizado desde el medio no selectivo empleando el reactivo de lisis del Kit comercial y se ha continuado con las instrucciones del procedimiento.
CONTENIDO
1. Organización de ejercicios de intercomparación en el
servicio de Microbiología
2. Ejercicio de intercomparación para la validación de tres
métodos de PCR. Norma ISO 10272 método horizontal
para la detección de Campylobacter spp
3. Resistencias: Decisión 2020/1729RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS Una de las principales prioridades de Salud Pública a nivel mundial DECISIÓN DE EJECUCIÓN (UE) 2020/1729 DE LA COMISIÓN de 17 de noviembre de 2020 relativa a la vigilancia y la notificación de la resistencia a los antimicrobianos de las bacterias zoonóticas y comensales y por la que se deroga la Decisión de Ejecución 2013/652/UE de la Comisión
RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS Decisión de Ejecución (UE) 2020/1729 “sobre el seguimiento y la notificación de la resistencia de las bacterias zoonóticas y comensales a los antibióticos” • Años pares: 2022, 2024, 2026 300 Pollo Plan 2021 - 2027 Pavo (
RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS
ESPECIES ESTUDIADAS
• Obligatorias:
Salmonella spp.;
b) Campylobacter coli (C. coli);
c) Campylobacter jejuni (C. jejuni);
d) la indicadora comensal Escherichia coli (E. coli);
e) Salmonella spp. y E. coli que produzcan las enzimas
siguientes:
• i) betalactamasas de espectro ampliado;
• ii) betalactamasas AmpC;
• iii) carbapenemasas.
• Opcionales:
Indicadores comensales Enterococcus faecalis y E.faeciumRESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS
Resistencias Antimicrobianas.
Decisión 1729/2021
Microdilución
Unificado / Estandarizado
ISO 20776-1:2017.RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS
Resistencias Resistencias
Antimicrobianas. Antimicrobianas.
Decisión 652/2013
Decisión 1729/2021
Ajuste del
Inoculación Lectura de
cultivo Paneles Incubación Interpretación
de los paneles paneles
(McFarland)
Volumen inóculo Tiempo/Temperatura Sensible/Resistente
18-24h/37±1ºC EUCAST
18-24h/35±1ºC Epidemiological cut off
Tiempo/ temperatura incubación Diseñados para el estudio CMI (mg/L)
18-24h/37±1ºC EUVSEC Y EUVSEC2
18-24h/35±1ºC EUVSEC3 Y EUVSEC2
Concentración inóculo Nuevo Antibiótico
Intervalos de concentraciónRESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS
AMIKACINA CEFEPIMA
AMPICILINA CEFOTAXIMA
AZITROMICINA CEFOTAXIMA + ÁC.
Panel 2: EUVSEC 2
Panel 1: EUVSEC3
CEFOTAXIMA CLAVULÁNICO
CEFTAZIDIMA CEFOXITINA
CLORAMFENICOL CEFTAZIDIMA
CIPROFLOXACINO CEFTAZIDIMA + ÁC.
CLAVULÁNICO
COLISTINA
ERTAPENEM
GENTAMICINA
IMIPENEM
MEROPENEM
MEROPENEM
ÁCIDO NALIDÍXICO
TEMOCILINA
SULFAMETOXAZOL
TETRACICLINA
TIGECICLINA
TRIMETOPRIMRESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS
CEPAS RESISTENTES A CEFOTAXIMA
Total de
Positivos
muestras
PORCINO 300 35
AÑO 2017
BOVINO 300 22
TOTAL 600 57
POLLO 300 234
AÑO 2018 PAVO - - AÑO 2021
TOTAL 300 234
233 muestras
22 positivas
PORCINO 300 29
AÑO 2019 BOVINO 300 17
TOTAL 600 46
POLLO 300 182
AÑO 2020
PAVO - -
TOTAL 300 182DATOS DE RESISTENCIAS EN ESPAÑA EN CARNE
Trimetroprim
Tigeciclina
Tetraciclina
Sulfametoxazol
A.Nalidíxico
BOVINO
Meropenem PORCINO
% E.coli 2019 Resistentes EUVSEC
Gentamicina
Colistina
Ciprofloxacina
Cloranfenicol
Ceftazidima
Cefotaxima
Azitromicina
Ampicilina
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Trimetroprim
Tigeciclina % E.coli 2020 Resistentes EUVSEC
Tetraciclina
Sulfametoxazol
A.Nalidíxico
Meropenem
Gentamicina
Colistina
Ciprofloxacina
POLLO
Cloranfenicol
Ceftazidima
Cefotaxima
Azitromicina
Ampicilina
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100DATOS DE RESISTENCIAS EN ESPAÑA EN CARNE
Temocilina
Meropenem
Imipenem % E.coli 2019 Resistentes EUVSEC2
Ertapenem
Ceftadizidima/clavulánico
BOVINO
Ceftazidima
PORCINO
Cefoxitina
Cefotaxima/clavulanico
Cefotaxima
Cefepime
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Temocilina
Meropenem
Imipenem % E.coli 2020 Resistentes EUVSEC2
Ertapenem
Ceftadizidima/clavulánico
Ceftazidima
POLLO
Cefoxitina
Cefotaxima/clavulanico
Cefotaxima
Cefepime
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100DATOS DE RESISTENCIAS EN ESPAÑA EN CARNE
TMP
TMP TGC
TGC TET
TET SMX
SMX NAL
NAL MERO
MERO GEN
GEN
COL
COL
CIP
CIP
CHL
CHL
TAZ
TAZ % Salmonella 2020 Resistentes
% Salmonella 2019 Resistentes FOT
FOT EUVSEC
EUVSEC
AZI AZI
AMP AMP
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
POLLO
BOVINO
PAVO
PORCINOTambién puede leer
