Virus West Nile: Diagnóstico y Caracterización viral - Ana Vázquez González Laboratorio de Arbovirus y Enfermedades Víricas Importadas Centro ...
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Virus West Nile:
Diagnóstico y
Caracterización viral
Ana Vázquez González
Laboratorio de Arbovirus y Enfermedades Víricas Importadas
Centro Nacional Microbiología. ISCIII
a.vazquez@isciii.es
WNV: Genoma
Familia: Flaviviridae / Género: Flavivirus
Envuelto
RNA ss
Polaridad positiva
11.000 kb
Inmunogénica Replicación viral
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Clasificación Cook et al. 2012. Journal of General Virology XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Virus transmitidos por mosquito (MBV)
JEV
group
Síndromes
NTAV
group Neurológicos
AROAV
group
Síndromes
Viscerotropos/
Hemorrágicos
Grard et al. 2010. Journal of General Virology
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Serocomplejo Encefalitis Japonesa
JEV
USUV
SLEV
MVE
V
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Ciclo biológico
Hammel et al. 2015. Journal of Virology
RURAL
URBANO
Infección células piel (fibroblastos
queratinocitos) y células dendríticas
Diseminación nódulos linfáticos y
torrente sanguíneo
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Emergencia WNV
BROTES DE WNV
1950 Israel
1974 Sudáfrica
América Emergente desde 1999
Europa Emergente desde 1996
28.805 casos
11.616 encefalitis/meningitis
Brotes en humanos, equinos o aves
1.114 muertes
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Linajes Virus West Nile XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Actividad de WNV en Europa
Año 2010 aumento severidad y nº casos:
Primeros casos humanos en España
Aparición linaje 2 en humanos
Cluster Rusia-Rumania
Cluster Centro-Europeo
XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Actividad de WNV en Europa: 2010-actualidad XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Estudios WNV en mosquitos
USUV Budapest05 Blackbird EF206350
USUV Vienna01 Blackbird AY453411
USUV Italy2009 bird JF266698
USU Germany BH65 11 Blackbird HE599647
USUV SAAR1776 Blackbird AY453412
MBV JEG USUTUAF013412
1) USUV USUV Spain 09 Cxperexiguus HQ833022
Hc3007 10Transecto2Cxperexiguus USUV
USUV
MBV JEG MVEVAF013389
MBV JEG JEVrATAB196925
MBV JEG ALFUYAF013360
MBV JEG YAOUNDEAF013413
2) WNV 7WNV HU2925 06 Spain Cxpipiens GU047875 WNV LINAJE 7
Koutnago Virus
Vázquez A., et al. 2010 Emerging Infectious Diseases • Linaje 1 6WNV KJMP502 66 Malasya1966
5WNV 804994brain India1980 DQ256376
(Cx perexiguus) HU6396 08 Spain Cxperexiguus WNV LINAJE 1
MBV JEG WNLEIVVlg00 27924AY278442
Vázquez A., et al. 2011 Am. J. Trop. Med. Hyg.,
• Nuevo linaje MBV JEG CACIPACORE AF013367
KVG
AVG
(Cx pipiens) DENGV
MBV AVG NARANJAL AF013390
MBV AVG BUSSUQUARA AF013366
MBV DVG KEDOUGOUAF013382
MBV JEG SLENC007580
MBV SVG SPONDWENIAF013406
NTV
THo-Mex07 EU879061 Cxquinquefasciatus
Taiforest EU159427 Uranotaenia mashonaen
USUV Nounane EU159426 Uranotaenia 2004Africa
HU566 03CMUTISOcaspius VIRUS DEL MOSQUITO DE LA MARISMA
LammiV FJ606789 Finland2004 Ae.cinereus
Chaoyang FJ883471 China08
UNKV
TBV
WNV UNKV
CFAVRioPiedras02 GQ165810 PRico AeAegypt
USUV CFA Aeaegypti M91671 1975
KRV KR75 AemacintoshiKEN AY149904 1999
AEFV Narita AB488408 AeAlbopictus
MOcFV HU1994 05OcCaspiusCMutis
Calbertado Canada03 EU569288 Cxtarsalis
MCxFV HU3738 06AyamonteCxtheileri
QuangBinhVN180 Viet02 FJ644291 Cxtritae
Nakiwogo Uga08 GQ165809 Mansoniaafricana
CxFV
XI Jornada de Enfermedades Emergentes TAMANABAT NC 003996WNV en aves y equinos
AVES
Andalucía:
• Estudios seroprevalencia: en aves migratorias, residentes, gorriones, entre 0,4%-17,9%. En fochas: 20%-43%. En aves de caza
(perdices y faisanes): AcNT frente WNV, Bagaza y Usutu
• Aves positivas: linaje 1
Castilla La Mancha (Ciudad Real):
2008: águilas imperiales, seroprevalencia del 23,8%
2014: virus linaje 1 en un buitre con infección neurológica
Castilla León (Ávila):
2015: en aves, linaje 1. 15 muestras positivas por ELISA, 11 confirmadas por NT.
Cataluña: 2018 y 2020 linaje 2
EQUINOS:
* 2010: Cádiz, Sevilla y Málaga
2011: Cádiz
2012: Cádiz
2013: Sevilla y Huelva
2014: Sevilla, Huelva, Cádiz y Ciudad Real
2015: Sevilla, Huelva, Cádiz y Badajoz
* 2016: Sevilla, Huelva, Cádiz y Córdoba
2017: Sevilla, Cádiz, Huelva y Málaga
* 2018: Huelva, Sevilla, Badajoz y Barcelona
2019: Andalucía
* 2020: 139 focos: Sevilla, Huelva, Cádiz, Jaén, Badajoz, Cáceres, Castellón,
Lleida y Tarragona
Seroprevalencias:
Andalucía: En 2010, 11% general, en Cádiz del 18,2%
Centro: Entre 2011 y 2013, 1,35% en Madrid y Segovia
XI Jornada de Enfermedades EmergentesWNV en humanos
Seroprevalencias confirmados por neutralización Casos Humanos:
2004: 1er caso confirmado, Extremadura
2006: 1er caso importado de Nicaragua
2010: 2 casos confirmados, Cádiz
*
* 2016: 3 casos, Sevilla
* 2018: 1er caso importado Rumania, linaje 2 con
complicaciones neurológicas y gastrointestinales
0,2% (2005)
2020: 77 casos en Andalucía (71) y Extremadura (6)
* 2004
* *
**2010
0,6% (2006) ***2016
1% (2015) Seroprevalencias del 1%
5 casos entre 2010 y 2016
77 casos en 2020 por linaje 1
1.- Suroeste España, zona endémica para WNV (Co-circulación varios flavivirus)
XI Jornada de Enfermedades EmergentesPlan Vigilancia España
Declaración de la enfermedad obligatoria, según la Orden de 11 de diciembre de 2008, un caso ya
se considera alerta en Salud Pública y brote
Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente, 2007 revisión anual
XI Jornada de Enfermedades EmergentesProtocolo de Vigilancia WNV XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Protocolo de Vigilancia WNV XI Jornada de Enfermedades Emergentes
Diagnóstico virológico
Muestras: DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL CON OTRAS ENCEFALITIS
• Suero/sangre * Toscana, Linfocoriomeninguitis (LCM), Usutu
• Líquido Cefalorraquídeo (LCR) DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL CON OTROS FLAVIVIRUS
• Orina * (Usutu, TBEV, DENV…)
• Biopsias/necrosias
Fase Aguda Fase Convaleciente
Cinética de marcadores
1) Técnicas de detección directa: detección 2) Técnicas de detección de la respuesta inmune específica del
de la partícula o antígenos virales huésped: detección de los anticuerpos generados frente a la infección
XI Jornada de Enfermedades EmergentesMétodos de detección de virus
1) Técnicas de detección directa de virus: Pico viremia: 4-7 días post-infección,
baja viremia Alta Especificidad
Confirmatorias
a) Screening
Detección de antígeno
RT-PCR (real time, cuantitativas, múltiples o simples)
Aislamiento viral
b) Genotipado: Secuenciación
Alta sensibilidad
2) Técnicas de detección de la respuesta inmune: detección de los anticuerpos Reactividades cruzadas
a) Screening
ELISA IgM/IgG
Inmunofluorescencia
b) Confirmación
Neutralización
XI Jornada de Enfermedades EmergentesMétodos comerciales detección VWN
WNV en España en 2020
Casos Humanos:
77 casos (40 confirmados y 37 probables):
* 71 casos son de Andalucía (57 de Sevilla y 14 de
Cádiz)
* 6 casos de Extremadura (Badajoz)
8 fallecidos
5 casos PCR + (orina)
93,4%: clínica neurológica
94,7% precisaron hospitalización
66,7% en la misma zona de los casos del 2016
Casos Equinos:
Aves:
139 focos: Sevilla, Huelva, Cádiz, Jaén, Badajoz,
8 aves PCR+ Cáceres, Castellón, Lleida y Tarragona.
7: linaje 1 del virus en Andalucía 8 detectados por vigilancia activa
1: linaje 2 en Lleida, el mismo que fue detectado en 131 por vigilancia pasiva al presentar síntomas
septiembre de 2017 en la misma zona. compatibles con la enfermedad.
XI Jornada de Enfermedades EmergentesWNV 2020 humanos: Andalucía
Brote Humanos en Andalucía
Diagnóstico primario: Hospital Virgen de las Nieves (Granada)
Confirmación y caracterización viral: CNM, Centro Nacional de Referencia
MUESTRAS HUMANAS:
• ORINAS: 5 orinas positivas previamente por PCR en el Hospital.
1- Screening molecular: qRT-PCR (Vázquez et al., 2016)
2- Caracterización molecular:
a) RT-Nested-PCR genérica (Vázquez et al., 2012). Linaje 1 del virus
b) NGS. Caracterización viral genoma completo
c) Aislamiento en cultivo celular
• SUEROS: muestras de sueros agudos y convalecientes con presencia de anticuerpos IgM e IgG pendientes de analizar
por neutralización viral, para la confirmación del diagnóstico serológico
a) Confirmación de IgM en sueros agudos
b) Confirmación de la presencia de anticuerpos específicos a WNV por la técnica de neutralización viral en
sueros convalecientes.
XI Jornada de Enfermedades EmergentesWNV 2020 mosquitos: Andalucía
MOSQUITOS:
• Screening molecular: qRT-PCR (Vázquez et al., 2016)
• Caracterización molecular:
a) RT-Nested-PCR genérica (Vázquez et al., 2012). Linaje 1 del virus
b) NGS. Caracterización viral
c) Aislamiento en cultivo celular
>300 pooles mosquitos (Culex modestus, Culex perexiguus y Culex pipiens) capturados entre Junio-Septiembre
* 32 pooles positivos (linaje 1) de 5 localidades (4 Sevilla y 1 Cádiz) en Culex perexiguus (31) y en un Culex pipiens (1)
Los virus detectados en el brote eran diferentes a las secuencias disponibles en
GenBank de los detectados en aves, mosquitos y caballos de los años 2007, 2008
y 2010 respectivamente
XI Jornada de Enfermedades EmergentesVirus West Nile:
Diagnóstico y
Caracterización viral
Ana Vázquez González
Laboratorio de Serología y Arbovirus
Centro Nacional Microbiología. ISCIII
a.vazquez@isciii.es
AGRADECIMIENTOS
Laboratorio de
Serología y Arbovirus
Unidades de Genómica
y de BioinformáticaTambién puede leer
