NEUMODX BKV QUANT TEST STRIP
←
→
Transcripción del contenido de la página
Si su navegador no muestra la página correctamente, lea el contenido de la página a continuación
NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
201800 NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip
Para uso diagnóstico in vitro con NeuMoDx™ 288 y NeuMoDx™ 96 Molecular Systems
El folleto de este paquete se debe leer atentamente antes de usar el producto. Se deben seguir las instrucciones del folleto.
La fiabilidad de los resultados del ensayo no se puede garantizar si hay alguna desviación de las instrucciones del folleto de
este paquete.
Para instrucciones detalladas, consulte el Manual del Operador del NeuMoDx™ 288 Molecular System; P/N 40600108
Para instrucciones detalladas, consulte el Manual del Operador del NeuMoDx™ 96 Molecular System; P/N 40600317
USO INDICADO
El NeuMoDx™ BKV Quant Assay es una prueba automatizada, in vitro, de amplificación de ácido nucleico para la identificación y cuantificación
del ADN del virus BK (BKV) en muestras extraídas de plasma/suero y orina humanos. El NeuMoDx BKV Assay implementado en el NeuMoDx™ 288
Molecular System y NeuMoDx™ 96 Molecular System (NeuMoDx™ System(s)) incorpora la extracción automatizada de ADN para aislar el ácido
nucleico objetivo de la muestra y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real para abordar las secuencias del genoma del BKV.
El NeuMoDx BKV Quant Assay está pensado como una ayuda para el diagnóstico y la monitorización de la infección por el virus BK, junto con
otros hallazgos clínicos y de laboratorio.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
La sangre entera humana recogida en tubos estériles de recogida de sangre que contienen EDTA como agente anticoagulante o en tubos de
preparación de plasma (PPT) puede utilizarse para la preparación del plasma, mientras que el suero debe recogerse en tubos de recogida de
suero o en tubos de separación (SST). Para analizar una muestra de orina, se recoge una muestra de orina en un recipiente de recogida de orina
estándar sin conservantes ni aditivos. Para preparar la prueba, el plasma/suero u orina, en un tubo de muestra primario o secundario compatible
con el sistema NeuMoDxTM, se carga en el sistema NeuMoDxTM utilizando una gradilla de tubo de muestra designado para iniciar el
procesamiento automatizado. En el caso de las muestras de plasma/suero, se mezcla una alícuota de 550 μL de la muestra con NeuMoDx™ Lysis
Buffer 1 del instrumento, o alternativamente se mezcla una alícuota de 100 μL de la muestra de plasma/suero con NeuMoDx™ Lysis Buffer 5. En
el caso de las muestras de orina, se mezcla una alícuota de 550 μL de la muestra con NeuMoDx™ Lysis Buffer 2 del instrumento. El sistema
NeuMoDxTM realiza automáticamente todos los pasos necesarios para extraer el ácido nucleico objetivo, preparar el ADN aislado para la
amplificación mediante PCR en tiempo real y, si está presente, amplificar y detectar los productos de la amplificación. El NeuMoDX™ BKV Quant
Assay incluye un control del proceso de muestreo de ADN (SPC1) para ayudar a monitorizar la presencia de posibles sustancias inhibidoras, así
como los fallos del sistema NeuMoDxTM o de los reactivos que puedan encontrarse durante los procesos de extracción y amplificación.
El poliomavirus BK (BKV) es un miembro de la familia Polyomaviridae de los virus de ADN de doble cadena (dsDNA). El BKV causa una infección
infantil común sin mayores secuelas clínicas, y ˃80% de los adultos son seroposi vos para el BKV.1 La infección primaria con este virus dsDNA es
generalmente asintomática y ocurre en la infancia. Los síntomas más comunes, cuando se observan, son fiebre e infección inespecífica de las vías
respiratorias superiores.2 Después de la infección primaria, el virus puede permanecer latente en muchos sitios, sobre todo en el riñón. La
transmisión puede ocurrir por medio de la exposición a los fluidos corporales. En estados de inmunodeficiencia celular relativa o absoluta, el
virus puede reactivarse y causar la enfermedad.2
La cuantificación de la carga viral basada en la PCR en el plasma/suero y la orina es la herramienta clínica estándar para monitorizar la
reactivación del BKV. Los estudios que informan de resultados cuantitativos de la PCR del BKV demuestran una correlación positiva entre las
cargas virales más altas y una mayor probabilidad de desarrollar una nefropatía asociada al BKV (BKVAN)1. Otros instrumentos clínicos utilizados
para describir los agregados del BKV en la orina son la microscopía electrónica que arroja agregados tridimensionales del BKV. Sin embargo, el
ensayo no es factible para la práctica clínica habitual debido al costo y a la limitada disponibilidad de la microscopía electrónica.1
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
El NeuMoDxTM BKV Quant Assay en el NeuMoDxTM System utiliza la NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip, el NeuMoDx™ BKV Calibrator Kit, el
NeuMoDx™ BKV External Control Kit, el NeuMoDx™ Lysis Buffer 1, el NeuMoDx™ Lysis Buffer 2, el NeuMoDx™ Lysis Buffer 5 y reactivos de uso
general NeuMoDx™ para realizar el análisis. La temperatura de almacenamiento de los reactivos es de +15/+30°C.
El NeuMoDxTM BKV Quant Assay combina la extracción, amplificación y detección automatizada de ADN mediante PCR en tiempo real. Las
muestras de plasma/suero u orina en tubos de muestra primarios o secundarios compatibles con el Sistema NeuMoDxTM se colocan en una
gradilla de tubos de prueba, que luego se carga en el Sistema NeuMoDxTM para su procesamiento. No es necesaria ninguna otra intervención del
operador.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 1 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Los sistemas NeuMoDxTM utilizan una combinación de calor, enzima lítica y reactivos de extracción para realizar automáticamente la lisis celular,
la extracción de ADN y la eliminación de inhibidores. Los ácidos nucleicos liberados son capturados por partículas paramagnéticas. Las partículas,
con los ácidos nucleicos ligados, se cargan en el NeuMoDx™ Cartridge donde los componentes no fijados y no ADN se lavan aún más con el
NeuMoDx™ Wash Reagent y el ADN fijado se eluye utilizando el NeuMoDx™ Release Reagent. A continuación, los sistemas NeuMoDxTMutilizan el
ADN eluido para rehidratar los reactivos de amplificación liofilizados patentados de Sentinel CH. (tecnología STAT-NAT®) que contienen todos los
elementos necesarios para la amplificación mediante PCR de los BKV específicos y los objetivos SPC1. Tras la reconstitución de los reactivos de
PCR liofilizados, el sistema NeuMoDxTM dispensa la mezcla preparada y lista para la PCR en el NeuMoDxTM Cartridge. La amplificación y la
detección de las secuencias de ADN de control y objetivo (si están presentes) se producen en el área de la cámara de PCR del NeuMoDxTM
Cartridge El NeuMoDxTM Cartridge también está diseñado para contener el amplicón después de la PCR en tiempo real, eliminando
esencialmente el riesgo de contaminación posterior a la amplificación.
Los objetivos amplificados se detectan en tiempo real mediante la química de la sonda de hidrólisis (comúnmente denominada química
TaqMan®) utilizando moléculas de sonda de oligonucleótidos fluorogénicos específicos de los amplicones para sus respectivos objetivos.
Las sondas TaqMan® consisten en un fluoróforo unido covalentemente al extremo de 5' de la sonda oligonucleótida y un inhibidor en el extremo
de 3'. Mientras la sonda está intacta, el fluoróforo y el inhibidor están en proximidad, lo que hace que la molécula del inhibidor inhiba la
fluorescencia emitida por el fluoróforo a través de la FRET (Transferencia de Energía de Resonancia de Förster).
Las sondas TaqMan® están diseñadas de tal manera que se recuecen dentro de una región de ADN amplificada por un conjunto específico de
cebadores. A medida que la Taq ADN polimerasa extiende el cebador y sintetiza la nueva cadena, la actividad de exonucleación de 5' a 3' de la
Taq ADN polimerasa degrada la sonda que se ha recocido en la plantilla. La degradación de la sonda libera el fluoróforo y rompe la proximidad al
inhibidor, superando así el efecto de inhibición debido a FRET y permitiendo la detección de fluorescencia del fluoróforo. La señal fluorescente
resultante que se detecta en el Ciclador Térmico de PCR cuantitativa del sistema NeuMoDxTM es directamente proporcional al fluoróforo liberado
y puede correlacionarse con la cantidad de ADN objetivo presente.3
Las sondas TaqMan® etiquetadas con fluoróforos en el extremo de 5', y los inhibidores en el extremo de 3', se utilizan para detectar el ADN del
BKV y el ADN del SPC1. El software del sistema NeuMoDxTM monitoriza la señal fluorescente emitida por las sondas TaqMan al final de cada ciclo
de amplificación. Cuando la amplificación se completa, el software del Sistema NeuMoDxTM analiza los datos e informa de un resultado final
(POSITIVE (POSITIVO) / NEGATIVE (NEGATIVO) / INDETERMINATE (INDETERMINADO) / UNRESOLVED (NO RESUELTO) / NO RESULT (SIN
RESULTADO)). Si el resultado es positivo y la concentración calculada está dentro de los límites de la cuantificación, el software del Sistema
NeuMoDx también proporciona un valor cuantitativo asociado a la muestra.
REACTIVOS/CONSUMIBLES
Material suministrado
Pruebas por Pruebas por
REF Contenido
unidad paquete
NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip
201800 Reactivos PCR liofilizados que contienen sondas y cebadores TaqMan® específicos para BKV 16 96
además de la sonda y los cebadores TaqMan® específicos de SPC1.
Reactivos y consumibles necesarios pero no suministrados (disponibles por separado de NeuMoDx)
REF Contenido
NeuMoDx™ Extraction Plate
100200
Partículas paramagnéticas secas, enzima lítica y controles del proceso de muestreo
NeuMoDx™ BKV Calibrator Kit
800600
Juegos de un solo uso de Calibradores Secos Alto y Bajo de BKV para establecer la validez de la curva estándar
NeuMoDx™ BKV External Control Kit
900601
Juegos de un solo uso de controles secos positivos y negativos de BKV para establecer la validez diaria del NeuMoDx BKV Quant Assay
400400 NeuMoDx™ Lysis Buffer 1
400500 NeuMoDx™ Lysis Buffer 2
400900 NeuMoDx™ Lysis Buffer 5
400100 NeuMoDx™ Wash Reagent
400200 NeuMoDx™ Release Reagent
100100 NeuMoDx™ Cartridge
235903 Puntas Hamilton CO-RE (300 µL) con filtros
235905 Puntas Hamilton CO-RE (1000 µL) con filtros
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 2 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Instrumentos necesarios
NeuMoDx™ 288 Molecular System [REF 500100] o NeuMoDx™ 96 Molecular System [REF 500200]
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
• La NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip es para uso de diagnóstico in vitro exclusivamente con los sistemas NeuMoDxTM.
• Lea todas las instrucciones incluidas en el folleto del kit antes de realizar la prueba.
• No utilice los reactivos o consumibles después de la fecha de caducidad indicada.
• No utilice reactivos si el sello de seguridad está roto o si el embalaje está dañado a su llegada.
• No utilice consumibles o reactivos si la bolsa protectora está abierta o rota a su llegada.
• No mezcle reactivos para la amplificación de otros kits comerciales.
• Conserve todas las NeuMoDx™ BKV Quant Test Strips protegidas de la luz y la humedad en sus sobres de aluminio.
• Antes de poder generar los resultados de las pruebas para las muestras clínicas, se debe disponer de una calibración de prueba válida
(generada mediante el procesamiento de los calibradores alto y bajo del NeuMoDxTM BKV Calibrator Kit REF 800600).
• NeuMoDxTM BKV External Control Kit (REF 900601) debe procesarse cada 24 horas durante toda la prueba con el NeuMoDxTM BKV Quant
Assay.
• El volumen mínimo de la muestra depende del tamaño del tubo, del portador de la muestra y del flujo de trabajo del volumen de la
muestra, tal y como se define a continuación. Un volumen inferior al mínimo especificado puede dar lugar a un error de "Quantity Not
Sufficient" (cantidad insuficiente).
• Realizar un ensayo BKV en muestras almacenadas a temperaturas inadecuadas o más allá de los tiempos de almacenamiento especificados
puede producir resultados no válidos o erróneos al utilizar la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip.
• Evite la contaminación microbiana y de desoxirribonucleasa (DNasa) de todos los reactivos y consumibles. Se recomienda el uso de pipetas
de transferencia desechables estériles sin DNasa si se utilizan tubos de muestras secundarios. Utilice una nueva pipeta para cada muestra.
• Para evitar la contaminación, no manipule ni desmonte ningún NeuMoDxTM Cartridge después de la amplificación. No recupere los
NeuMoDxTM Cartridges del contenedor de residuos de peligro biológico (NeuMoDxTM 288 Molecular System) o del cubo de residuos de
peligro biológico (NeuMoDxTM 96 Molecular System) bajo ninguna circunstancia. El NeuMoDxTM Cartridge está diseñado para prevenir la
contaminación.
• En los casos en que el laboratorio también realice pruebas de PCR de tubo abierto, se debe tener cuidado de asegurar que no se contaminen
la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip, los consumibles y reactivos adicionales necesarios para las pruebas, el equipo de protección personal
como guantes y batas de laboratorio y el sistema NeuMoDxTM.
• Deben utilizarse guantes de nitrilo limpios y sin polvo cuando se manipulen los reactivos y consumibles NeuMoDxTM. Se deberá tener
cuidado de no tocar la superficie superior del NeuMoDxTM Cartridge, la superficie de sellado de la lámina de la NeuMoDxTM BKV Quant Test
Strip o de la NeuMoDxTM Extraction Plate, o la superficie superior de los contenedores NeuMoDxTM Lysis Buffer 1, 2 y 5; la manipulación de
los consumibles y reactivos deberá hacerse tocando únicamente las superficies laterales.
• Se proporcionan Fichas de Datos de Seguridad (SDS) para cada reactivo.
• Lávese bien las manos después de realizar la prueba.
• No se debe pipetear por la boca. No fume, beba ni coma en las zonas donde se manipulan las muestras o los reactivos.
• Siempre se deben manipular las muestras como si fueran infecciosas y de conformidad con procedimientos de laboratorio seguros como los
descritos de acuerdo con la norma de la OSHA sobre patógenos transmitidos por la sangre (OSHA Standard on Bloodborne Pathogens4),
Nivel de Bioseguridad 25 u otras prácticas de bioseguridad apropiadas6,7 para los materiales que contienen o se sospecha que contienen
agentes infecciosos.
• Deseche los reactivos no utilizados y los residuos de acuerdo con las regulaciones nacionales, federales, provinciales, estatales y locales.
• Los resultados obtenidos con el NeuMoDx™ BKV Quant Assay deben interpretarse junto con otros datos clínicos y de laboratorio.
• Al igual que con otras pruebas, los resultados negativos no descartan la infección por BK.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 3 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
ALMACENAMIENTO, MANIPULACIÓN Y ESTABILIDAD DEL PRODUCTO
• NeuMoDx™ BKV Quant Test Strips son estables en el envase primario entre 15 y 30°C hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
inmediata del producto.
• Una NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip cargada en el sistema NeuMoDxTM es estable durante 32 días; el software del sistema NeuMoDxTM
solicitará que se retiren las tiras de prueba que hayan estado en uso a bordo del sistema NeuMoDxTM durante más de 32 días y será
necesario abrir nuevas NeuMoDxTM BKV Quant Test Strips (extraer las tiras de la bolsa) y cargarlas en el sistema NeuMoDx. No retire el
papel de aluminio de la tira durante la carga en el sistema NeuMoDx.
• Los calibradores y controles NeuMoDxTM no son infecciosos pero deben desecharse en los residuos de laboratorio de riesgo biológico
después de su uso, ya que contendrán material objetivo después de su procesamiento en el sistema que puede causar contaminación si no
se manipula adecuadamente.
RECOGIDA, TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
1. Manipule todas las muestras como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos.
2. No congele la sangre entera o las muestras de plasma/suero almacenadas en tubos primarios.
3. Para preparar las muestras de plasma, la sangre entera debe ser recolectada en tubos estériles usando EDTA como anticoagulante. Las
muestras de suero deben prepararse en tubos separadores de suero. Las muestras de orina deben ser recogidas en tubos o vasos
estériles. Siga las instrucciones del fabricante del tubo de recogida de muestras.
4. La sangre entera recogida en los dispositivos mencionados anteriormente puede almacenarse y/o transportarse durante un máximo de
24 horas a una temperatura de 2°C a 8°C antes de la preparación del plasma/suero. La preparación de las muestras debe realizarse de
acuerdo con las instrucciones del fabricante.
5. El almacenamiento a temperatura ambiente de la orina fresca sin procesar debe reducirse al mínimo, ya que el bajo pH y el alto
contenido de urea desnaturalizan rápidamente el ADN, especialmente a 25 °C y más.
6. Las muestras de plasma/suero y orina preparadas pueden almacenarse en el sistema NeuMoDxTM hasta 24 horas antes de su
procesamiento. Si se requiere un tiempo de almacenamiento adicional, se recomienda que las muestras se refrigeren o congelen como
alícuotas secundarias.
7. Las muestras de plasma/suero y orina preparadas deben almacenarse entre 2 y 8 °C durante no más de 8 días antes de la prueba y un
máximo de 24 horas a temperatura ambiente.
8. Las muestras preparadas pueden almacenarse a < -20°C hasta 8 semanas para el plasma y 2 semanas para el suero antes de ser
procesadas; tanto las muestras de plasma como las de suero no deben someterse a más de 2 ciclos de congelación/descongelación
antes de su uso:
a. Si las muestras se congelan, deje que las muestras se descongelen completamente a temperatura ambiente (15 - 30°C);
agite para generar una muestra distribuida uniformemente.
b. Una vez que las muestras congeladas se descongelan, las pruebas deben realizarse en un plazo de 24 horas.
c. No se recomienda congelar el plasma/suero en los tubos de recogida primarios.
9. Una vez procesadas, las muestras de orina pueden almacenarse a una temperatura de 2 a 8 °C.
10. Si se envían las muestras, deben ser empaquetadas y etiquetadas de acuerdo con los reglamentos nacionales y/o internacionales
aplicables.
11. Etiquete las muestras claramente e indique que son para pruebas de BKV.
12. Proceda a la sección de preparación de la prueba.
El proceso general para la implementación del NeuMoDxTM BKV Quant Assay se resume en la Figura 1.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 4 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
IMPLEMENTACIÓN DEL
NEUMODXTM BKV QUANT ASSAY
Reactivos específicos de la prueba
Si es generada mediante el
de carga
software NeuMoDxTM, cargar los
• NeuMoDxTM Lysis Buffer 1/2/5
consumibles requeridos
• NeuMoDxTM Quant test Strip
Procesar
NeuMoDxTM
BKV Calibrator
Kit
Repetir cada 90 días O
¿Son váli- si se está usando un
dos los calibra- nuevo Lote de
dores? NeuMoDx™ BKV Quant
Assay Test Strip
SÍ
Procesar
NeuMoDxTM
BKV External
Control Kit
¿Son
válidos los
controles? Repetir cada
24 horas
SÍ
PROCESAR LAS MUESTRAS DE RUTINA
Figura 1: Flujo de trabajo de la implementación del NeuMoDx BKV Quant Assay
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 5 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
INSTRUCCIONES DE USO
Preparación de la prueba
Para las muestras de plasma/suero, el NeuMoDx BKV Quant Assay puede realizarse directamente desde los tubos de extracción de sangre
primarios o desde alícuotas de muestras en tubos secundarios. El procesamiento puede realizarse utilizando uno de los dos flujos de trabajo de
procesamiento de volumen de muestras: flujo de trabajo de volumen de muestras de 550 µL o flujo de trabajo de procesamiento de muestras de
100 µL. Las muestras de orina se realizan usando solamente el flujo de trabajo de volumen de muestra de 550 µL.
1. Aplique la etiqueta de código de barras de la muestra a un tubo de muestra compatible con el sistema NeuMoDxTM. El tubo de
extracción de sangre primario puede etiquetarse y colocarse directamente en una gradilla de tubos de muestra de 32 tubos, tras la
centrifugación según las instrucciones del fabricante.
2. Si se prueba la muestra de plasma/suero en el tubo de recogida primario, coloque el tubo con código de barras en una gradilla de tubos
de muestra y asegúrese de quitar la tapa antes de cargarlo en el Sistema NeuMoDx. Los volúmenes mínimos por encima de la capa de
gel/leucocítica se definen a continuación y se cumplirán si las muestras se recogen y procesan de acuerdo con las instrucciones del
fabricante del tubo. No se garantiza el rendimiento de las muestras que se recogen de forma incorrecta.
Volumen de muestra mínimo necesario
Recogida de sangre
Tipo de tubo Flujo de trabajo Flujo de trabajo
de 550 µL de 100 µL
SST – 3.5 mL 1550 µL 1150 µL
PPT/SST – 5.0 mL 1800 µL 1400 µL
PPT/SST – 8.5 mL 2500 µL 2150 µL
K2EDTA/Suero – 4.0 mL 1050 µL 650 µL
K2EDTA/Suero – 6.0 mL 1250 µL 850 µL
K2EDTA/Suero – 10.0 mL 1600 µL 1200 µL
3. Para muestras de orina, o muestras de plasma/suero en un tubo secundario, transfiera una alícuota de la muestra al tubo de muestras
con código de barras compatible con el sistema NeuMoDx según los volúmenes definidos a continuación:
Volumen de muestra mínimo necesario
Gradilla de tubo de muestra Tamaño del tubo Flujo de trabajo
Flujo de trabajo
de 100 µL
de 550 µL
(solo plasma/suero)
Gradilla de tubo de muestra de 32 tubos 11–14 mm de diámetro para 60–120 mm de altura 700 µL 350 µL
Gradilla de tubo de muestra de 24 tubos 14.5-18 mm de diámetro para 60–120 mm de altura 1100 µL 750 µL
Gradilla de tubo de muestra de bajo volumen Tubo de microcentrífuga de fondo cónico de 1.5 mL 650 µL 250 µL
Funcionamiento del Sistema NeuMoDx
Para instrucciones detalladas, consulte el Manual del Operador de NeuMoDx™ 288 y 96 Molecular Systems (p/n 40600108 & 40600317)
1. Cargue la orden de prueba en el sistema NeuMoDx según el tipo de muestra y tubo deseados:
• El volumen de 550 µL de la muestra se prueba definiendo el tipo de muestra como “Plasma”, “Suero”, u “Orina”
• El volumen de 100 µL de la muestra se prueba definiendo el tipo de muestra como “Plasma2” o “Suero2”
• Si no se define en la orden de prueba, el tipo de muestra de Plasma en un Tubo Secundario se usará por defecto.
2. Corte las bolsas de NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip en el punto indicado por las muescas laterales.
3. Saque las tiras de las bolsas inmediatamente antes de su uso.
4. Antes de usarlas, asegúrese de que la bolsa esté siempre bien sellada y de que el saquito de desecante esté dentro de la bolsa. Use sólo
paquetes no dañados.
5. Elimine las bolsas de aluminio y su contenido si los saquitos de desecante pasan de naranja a verde.
6. Llene uno o varios soportes de NeuMoDxTM System Test Strip con NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip(s) y use la pantalla táctil para cargar el
soporte de tiras de prueba en el Sistema NeuMoDxTM.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 6 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
7. Si lo solicita el software del sistema NeuMoDxTM, añada los consumibles necesarios los porta-consumibles del Sistema NeuMoDxTM y use la
pantalla táctil para cargar los soportes en el SistemaNeuMoDxTM.
8. Si el software del sistema NeuMoDxTMlo solicita, sustituya el NeuMoDxTM Wash Reagent, NeuMoDxTM Release Reagent, vacíe los residuos de
cebado, el contenedor de residuos de peligro biológico (sólo NeuMoDx 288 Molecular System), el cubo de residuos de puntas (NeuMoDx
96 Molecular System) o el cubo de residuos de peligro biológico (sólo NeuMoDx 96 Molecular System), según corresponda.
9. Si el software del sistema NeuMoDxTMlo solicita, procese los calibradores (REF 800600) y/o los controles externos (REF 900601) según sea
necesario. Se puede encontrar más información sobre los calibradores y controles en la sección Procesamiento de resultados.
10. Cargue la(s) muestra(s)/calibrador(es)/tubo(s) de control en una gradilla estándar de 32 tubos y asegúrese de que se retiren las tapas de
todos los tubos.
11. Coloque la gradilla de tubos de muestra en cualquier posición abierta en el estante del cargador automático y utilice la pantalla táctil para
cargar la gradilla en el sistema NeuMoDxTM. Esto iniciará el procesamiento de las pruebas cargadas para la(s) prueba(s) identificada(s),
siempre que exista una orden de prueba válida en el sistema.
LIMITACIONES
• La NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip solo puede usarse en Sistemas NeuMoDxTM.
• El rendimiento de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip se ha establecido para muestras de plasma y suero preparadas a partir de sangre
entera, recogidas con EDTA como anticoagulante, y para muestras de orina; el uso de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip con otros tipos
de muestras clínicas no se ha evaluado y se desconocen las características de rendimiento de la prueba para otros tipos de muestras.
• Se ha observado un pequeño aumento en el límite de detección y en el límite inferior de cuantificación del NeuMoDx BKV Quant Assay
cuando se utiliza un flujo de trabajo de 100 µL de volumen de muestra.
• El NeuMoDx BKV Quant Assay no debe utilizarse con muestras de humanos heparinizados.
• Dado que la detección del BKV depende del número de organismos presentes en la muestra, la fiabilidad de los resultados depende de la
correcta recogida, manipulación y almacenamiento de los especímenes.
• Los calibradores y controles externos deben procesarse según las recomendaciones de los folletos de los paquetes y si el software del
sistema NeuMoDxTMlo solicita, antes de procesar las muestras clínicas de rutina.
• Pueden producirse resultados erróneos debido a una recogida, manipulación y almacenamiento inadecuados de las muestras, a errores
técnicos o a la confusión de los tubos de muestras. Además, podrían producirse resultados negativos falsos porque el número de partículas
virales de la muestra está por debajo del límite de detección del NeuMoDxTM BKV Quant Assay.
• El uso del sistema NeuMoDxTM está limitado a personal capacitado en el manejo del Sistema NeuMoDxTM.
• Si ni el objetivo BKV ni el objetivo SPC1 se amplifican, se notificará un resultado no válido (indeterminado, sin resultado o sin resolver) y se
deberá repetir la prueba.
• Si el resultado del NeuMoDxTM BKV Quant Assay es positivo, pero el valor de cuantificación está más allá de los límites de cuantificación, el
Sistema NeuMoDxTMinformará si el BKV detectado estaba por debajo del Límite Inferior de Cuantificación (LLoQ) o por encima del Límite
Superior de Cuantificación (ULoQ).
• En el caso de que el BKV detectado estuviera por debajo del LLoQ, el NeuMoDxTM BKV Quant Assay puede repetirse (si se desea) con otra
alícuota de la muestra.
• En el caso de que el BKV detectado esté por encima de ULoQ, el NeuMoDxTM BKV Quant Assay se puede repetir con una alícuota diluida de
la muestra original. Se recomienda una dilución de 1:1000 en plasma negativo de BKV o diluyente Basematrix 53 (Basematrix) (SeraCare,
Milford, MA). La concentración de la muestra original se puede calcular de la siguiente manera:
Concentración del espécimen original = log10 (factor de dilución) + concentración notificada de la muestra diluida.
• La presencia ocasional de inhibidores de la PCR en el plasma/suero o en la orina puede dar lugar a un error de cuantificación del sistema; si
esto ocurre, se recomienda repetir la prueba con la misma muestra diluida en el Basematrix a 1:10 o 1:100.
• Un resultado positivo no indica necesariamente la presencia de organismos viables. Sin embargo, un resultado positivo indica una presunta
presencia de ADN del BKV.
• La eliminación o las mutaciones en las regiones conservadas a las que se dirige el NeuMoDxTM BKV Quant Assay pueden afectar a la
detección o pueden dar lugar a un resultado erróneo al utilizar la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip.
• Los resultados del NeuMoDxTM BKV Quant Assay deben utilizarse como complemento de las observaciones clínicas y otra información
disponible para el médico; la prueba no tiene por objeto diagnosticar la infección.
• Se recomiendan las buenas prácticas de laboratorio, incluido el cambio de guantes entre la manipulación de las muestras de los pacientes,
para evitar la contaminación.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 7 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
PROCESAMIENTO DE LOS RESULTADOS
Los resultados disponibles pueden verse o imprimirse desde la pestaña "Resultados" de la ventana de resultados de la pantalla táctil del
SistemaNeuMoDxTM.
Los resultados del NeuMoDxTM BKV Quant Assay son generados automáticamente por el software del sistema NeuMoDxTM utilizando el algoritmo
de decisión y los parámetros de procesamiento de resultados especificados en el Archivo de Definición del Ensayo de NeuMoDxTMBKV (BKV ADF).
Un resultado de un NeuMoDxTM BKV Quant Assay puede ser notificado como Negativo, Positivo con una concentración de BKV notificada,
Positivo por encima de ULoQ, Positivo por debajo de LLoQ, Indeterminado (IND), No resuelto (UNR), o Sin resultado (NR) basado en el estado de
amplificación del objetivo y el control del proceso de la muestra. Los resultados se informan en base al algoritmo de decisión, que se resume a
continuación en la Table 1.
Tabla 1: Resumen del Algoritmo de Decisión del NeuMoDx BKV Quant Assay
Control del proceso Interpretación del
Resultado BKV
de muestra (SPC1) resultado
Amplificado
1.3 ≤ [BKV] ≤ 8.0 log10 IU/mL
Positivo con Concentración Amplificado o No ADN de BKV detectado
(flujo de trabajo 550 µL)*
Notificada Amplificado dentro del rango cuantitativo
2.3 ≤ [BKV] ≤ 8.0 log10 IU/mL
(flujo de trabajo 100 µL)*
Positivo, por encima del ADN de BKV detectado por
Amplificado Amplificado o No
Límite Superior de encima del rango
[BKV] > 8.0 log10 IU/mL Amplificado
Cuantificación [ULoQ] cuantitativo
Positivo, por debajo del Amplificado ADN de BKV detectado por
Amplificado o No
Límite Inferior de [BKV] < 1.3 log10 IU/mL (flujo de trabajo 550 µL)* debajo del rango
Amplificado
Cuantificación [LLoQ] [BKV] < 2.3 log10 IU/mL (flujo de trabajo 100 µL)* cuantitativo
Negativo No Amplificado Amplificado ADN de BKV no detectado
Todos los resultados objetivo
No amplificado, detectado error de sistema, procesamiento de muestra
Indeterminado fueron no válidos; volver a
completado
probar la muestra †
El procesamiento de la
No amplificado, detectado error de sistema, procesamiento de muestra
Sin Resultado muestra fue cancelado;
cancelado
volver a probar la muestra†
Todos los resultados objetivo
No resuelto No Amplificado, No se ha detectado ningún error de sistema fueron no válidos; volver a
probar la muestra †
*el flujo de trabajo de 550 µL se utiliza con muestras de plasma/suero y orina. el flujo de trabajo de 100 µL se utiliza solo con muestras de plasma/suero.
†El sistema NeuMoDx está equipado con una capacidad de repe ción/relanzamiento automá cos que el usuario final puede elegir para
asegurar que un resultado IND/NR/UNR se vuelva a procesar automáticamente para minimizar los retrasos en el informe de resultados.
Cálculo de la prueba
1. En el caso de las muestras que se encuentran dentro del rango de cuantificación del NeuMoDxTM BKV Quant Assay, la concentración de
ADN de BKV en las muestras se calcula utilizando la curva estándar almacenada junto con el coeficiente de calibración y el volumen de la
muestra.
a. El coeficiente de calibración se calcula sobre la base de los resultados del NeuMoDxTM BKV Calibrator Kit procesados para
establecer la validez de la curva estándar, para un lote determinado de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip, en un sistema
NeuMoDxTMespecífico.
b. El coeficiente de calibración se incorpora en la determinación final de la concentración de ADN de BKV.
c. El software NeuMoDx tiene en cuenta el volumen de entrada de la muestra al determinar la concentración de ADN de BKV por
mL de muestra.
2. Los resultados del NeuMoDxTM BKV Quant Assay son notificados en log10 IU/mL.
3. La cuantificación resultante de las muestras desconocidas es trazable según la 1a Norma Internacional de la OMS para el virus BK (BKV)
(14/212)9.
Calibración de la prueba
Se requiere una calibración válida basada en la Curva Estándar para cuantificar el ADN del BKV en las muestras. Para generar resultados válidos,
se debe completar una calibración de prueba utilizando los calibradores proporcionados por NeuMoDxTM Molecular, Inc.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 8 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Calibradores
1. Los calibradores de BKV NeuMoDxTM se suministran en un kit (REF 800600) y están compuestos por un pellet seco de ADN de BKV sintético.
2. Es necesario procesar un conjunto de calibradores BKV con cada nuevo lote de NeuMoDxTM BKV Quant Test Strips si se carga un nuevo
archivo de definición de ensayo BKV en el sistema NeuMoDxTM, si el conjunto actual de calibradores ha superado el período de validez
(actualmente fijado en 90 días) o si se modifica el software del sistema NeuMoDxTM.
3. El software del Sistema NeuMoDxTM notificará al usuario cuando sea necesario procesar los calibradores; no se puede utilizar un nuevo lote
de tiras de prueba para realizar pruebas hasta que los calibradores se hayan procesado con éxito.
4. Si es necesario procesar un nuevo lote de calibradores BKV, lea todas las instrucciones contenidas en el folleto del NeuMoDxTM BKV
Calibrator Kit antes de realizar la prueba.
5. La validez de la calibración se establece de la siguiente manera:
a) Un juego de dos calibradores - alto y bajo - necesita ser procesado para establecer la validez.
b) Para generar resultados válidos, al menos 2 de las 3 réplicas deben dar resultados dentro de parámetros predefinidos. El objetivo
nominal del calibrador bajo es de 3 log10 IU/mL y el objetivo nominal del calibrador alto es de 5 log10 IU/mL.
c) Se calcula un coeficiente de calibración para tener en cuenta la variación prevista entre los lotes de tiras de prueba; este coeficiente
de calibración se utiliza en la determinación de la concentración final de BKV.
6. Si uno o ambos calibradores fallan en el control de la validez, repita el procesamiento de los calibradores fallidos usando un nuevo vial. En
caso de que un calibrador falle en su validez, sólo se puede repetir el calibrador fallido ya que el sistema no requiere que el usuario ejecute
de nuevo ambos calibradores.
Control de Calidad
Los reglamentos locales suelen especificar que el laboratorio es responsable de los procedimientos de control que monitorizan la exactitud y la
precisión del proceso analítico completo, y debe establecer el número, el tipo y la frecuencia de las pruebas de los materiales de control
utilizando especificaciones de rendimiento verificadas para un sistema de pruebas aprobado y no modificado.
Controles Externos
1. Los controles externos del BKV son proporcionados por NeuMoDx Molecular, Inc. en el BKV External Control Kit (REF900601). Los controles
positivos contienen un pellet seco de ADN sintético del BKV.
2. Los controles externos positivos y negativos deben ser procesados una vez cada 24 horas. Si no existe un juego de controles externos válidos,
el software del Sistema NeuMoDxTM solicitará al usuario que estos controles se procesen antes de que se puedan comunicar los resultados
de las muestras.
3. Si se requieren controles externos, prepare los controles positivos y negativos como se indica en el folleto del NeuMoDx BKV External
Control Kit antes de realizar la prueba.
4. Utilizando la pantalla táctil y una gradilla de tubo de muestra colocada en el estante del cargador automático, cargue los viales de control
positivo y negativo en el sistema NeuMoDxTM . El Sistema NeuMoDxTM reconocerá los códigos de barras y comenzará a procesar los tubos de
muestras, a menos que no se disponga de los reactivos o consumibles necesarios para la prueba.
5. La validez de los controles externos será evaluada por el sistema NeuMoDxTM en función de los resultados previstos. El control positivo debe
proporcionar un resultado positivo de BKV y el control negativo debe proporcionar un resultado negativo de BKV.
6. La manipulación de resultados discrepantes para los controles externos debe realizarse de la siguiente manera:
a) Un resultado de prueba positivo notificado para una muestra de control negativo indica un problema de contaminación de la
muestra.
b) Un resultado de prueba negativo notificado para una muestra de control positivo puede indicar que existe un problema relacionado
con el reactivo o el instrumento.
c) En cualquiera de los casos anteriores, o en el caso de un resultado indeterminado (IND) o sin resultado (NR), repita el control o
controles externos de BKV NeuMoDxTMfallidos con un nuevo vial del control o controles que no superen la prueba de validez.
d) Si el control externo positivo de BKV NeuMoDxTM continúa notificando un resultado negativo, póngase en contacto con el servicio de
atención al cliente de NeuMoDxTM.
e) Si el control externo negativo de BKV NeuMoDxTM continúa notificando un resultado positivo, intente eliminar todas las fuentes de
contaminación potencial, incluyendo la sustitución de TODOS los reactivos antes de contactar al servicio de atención al cliente de
NeuMoDxTM.
Controles (internos) del proceso de muestra
En la NeuMoDxTM Extraction Plate se incorpora un Control del Proceso de Muestras (SPC1) exógeno que se somete a todo el proceso de
extracción de ácido nucleico y a la amplificación de la PCR en tiempo real con cada muestra. En cada NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip también
se incluyen cebadores y una sonda específicos para SPC1, lo que permite detectar la presencia de SPC1 junto con el ADN del BKV objetivo (si está
presente) mediante una PCR múltiple en tiempo real. La detección de la amplificación del SPC1 permite que el software del sistema NeuMoDxTM
supervise la eficacia de los procesos de extracción de ADN y de amplificación por PCR.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 9 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Resultados no válidos
Si un NeuMoDxTM BKV Quant Assay realizado en el sistema NeuMoDxTM no produce un resultado válido, se notificará como Indeterminado (IND),
Sin resultado (NR) o No resuelto (UNR) en función del tipo de error que se haya producido.
Se notificará un resultado IND si se detecta un error del sistema NeuMoDxTM durante el procesamiento de la muestra. En caso de que se
notifique un resultado IND, se recomienda repetir la prueba.
Se notificará un resultado UNR si no se detecta una amplificación válida de ADN de BKV o SPC1, lo que indica un posible fallo del reactivo o la
presencia de inhibidores. En el caso de que se notifique un resultado UNR, se puede volver a realizar la prueba como primer paso. Si la repetición
de la prueba falla, se puede utilizar una muestra diluido para mitigar los efectos de cualquier inhibición de la muestra.
Si un NeuMoDx BKV Quant Assay realizado en el Sistema NeuMoDx no produce un resultado válido y el procesamiento de la muestra se
interrumpe antes de completarse, se notificará como un Sin resultado (NR). En caso de que se notifique un NR, se recomienda repetir la prueba.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Sensibilidad analítica – Límite de detección12
La sensibilidad analítica del NeuMoDxTM BKV Quant Assay se caracterizó probando una serie de diluciones del panel de verificación EDX BKV
(Diagnóstico exacto), calibrado según la 1a Norma Internacional de la OMS para el virus BK (BKV) (14/212) 9, en muestras de plasma/suero y orina
negativas al BKV, para determinar el límite de detección (LoD) en los sistemas NeuMoDx. En el caso del plasma/suero (550 µl) y la orina, el LoD se
definió como el nivel objetivo más cercano, determinado experimentalmente, por encima de la concentración determinada por el análisis de
estilo Probit con un intervalo de confianza (IC) del 95%. Para el plasma/suero (100 µL) se investigó una concentración de una sola muestra de 200
IU/mL mediante análisis de tasa de acierto y se validó para el LoD si la tasa de detección era superior al 95%. El estudio se realizó durante 3 días
en múltiples sistemas con múltiples lotes de reactivos NeuMoDxTM . Cada sistema procesó 42 réplicas en cada nivel de dilución (muestras
positivas) y 8 réplicas para muestras negativas por día. Las tasas de detección se muestran en las Tablas 2 y 3.
Tabla 2: Tasas de detección positiva para la determinación de la LoD del NeuMoDx BKV Quant Assay (Plasma/Serum 550 µL y orina)
Flujo de trabajo 550 µL PLASMA/SUERO ORINA
Concentración Concentración
Número Número de
objetivo objetivo [log10 Número de Tasa de Número de Tasa de
de pruebas pruebas
[IU/mL] IU/mL] Positivos detección Positivos detección
válidas válidas
50 1.70 41 41 100% 41 41 100%
20 1.30 42 42 100% 40 39 98%
10 1.00 41 35 85% 41 31 76%
5 0.30 41 16 39% 41 12 29%
NEG 0.00 20 0 0% 24 0 0%
Tabla 3: Tasas de detección positiva para la determinación de la LoD del NeuMoDx BKV Quant Assay (Plasma/Serum 100 µL)
Flujo de trabajo 100 µL PLASMA/SUERO
Concentración Concentración
Número
objetivo objetivo [log10 Número de Tasa de
de pruebas
[IU/mL] IU/mL] Positivos detección
válidas
200 2.30 89 88 99%
Se determinó que la LoD del NeuMoDxTM BKV Quant Assay en plasma/suero (flujo de trabajo de 550 µl) era de 20 IU/mL (1.3 log10 IU/mL) con un
intervalo de confianza (IC) del 95% de 11.03; en orina, se determinó que la LoD era de 20.0 IU/mL (1.3 log10 IU/mL) con un intervalo de confianza
(IC) del 95% de 13.09; en plasma/suero (flujo de trabajo de 100 µl) se determinó que la LoD era de 200 UI/mL (2.3 log10 IU/mL).
Sensibilidad analítica - Límite Inferior de Cuantificación (LLoQ) y Límite Superior de Cuantificación (ULoQ)12
El Límite Inferior de Cuantificación (LLoQ) y el Límite Superior de Cuantificación (ULoQ) se definen como el nivel objetivo inferior y el nivel
objetivo superior en el que se logra una detección de >95% Y el TAE ≤ 1.0. Para determinar el LLoQ y el ULoQ, se calculó el error analítico total
(TAE) para cada uno de los niveles objetivo del BKV que notificaban > 95% de detección. El TAE se define de la siguiente manera:
TAE = sesgo + 2*DE [Estadística de Westgard]
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 10 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
El sesgo es el valor absoluto de la diferencia entre el promedio de la concentración calculada y la concentración esperada. El DE se refiere a la
desviación estándar del valor cuantificado de la muestra.
Los resultados recopilados para los 5 niveles de plasma/suero de BKV o muestras de orina utilizados en el estudio LLoQ/ULoQ se muestran en las
Tablas 4 y 5. Sobre la base de este conjunto de datos y la LoD previamente determinada, se determinó que el LLoQ y el ULoQ eran de 20 UI/mL
(1.3 log10 IU/mL) y 7.58x107 UI/mL (aquí aproximados a 8 log10 UI/mL), respectivamente para plasma/suero 550 µL y orina y 200 UI/mL (2.3 log10
UI/mL) para plasma/suero 100 µL.
Tabla 4: ULoQ y LLoQ de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip, con sesgo y TAE (Plasma/Suero 550 µL y Orina)
Plasma/Suero 550 µL Orina
Concentración Concentración
Concentración Concentración
Objetivo Objetivo [log10 Detección Detección
media DE Sesgo TAE media DE Sesgo TAE
[IU/mL] IU/mL] (%) (%)
[log10 IU/mL] [log10 IU/mL]
7.58x107 8 8 100 0.09 0.05 0.23 8 100 0.09 0.10 0.29
50 1.70 1.80 100 0.18 0.10 0.46 1.84 100 0.22 0.14 0.59
20 1.30 1.56 100 0.25 0.26 0.76 1.66 100 0.29 0.36 0.93
10 1.00 1.46 85 0.27 0.46 1.01 1.41 76 0.41 0.41 1.22
5 0.30 1.27 39 0.48 0.97 1.92 1.31 29 0.52 1.01 2.04
Tabla 5: ULoQ y LLoQ de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip, con sesgo y TAE (Plasma/Suero 100 µL)
Concentración Concentración Plasma/Suero 100 µL
Objetivo Objetivo [log10 Conc. Media Detección
DE Sesgo TAE
[IU/mL] IU/mL] [log10 IU/mL] (%)
7.58x107 8 8 100 0.09 0.07 0.25
200 2.30 2.30 99 0.39 0.003 0.78
Basándose en el resultado de estos estudios, se determinó que el LoD y el LLoQ del NeuMoDxTM BKV Quant Assay eran ambos de 20 IU/mL (1.3
log10 IU/mL) para plasma/suero y orina con el flujo de trabajo de 550 µL, y de 200 IU/mL (2.30 log10 IU/mL) para plasma/suero cuando se utilizaba
el flujo de trabajo de 100 µL. El ULoQ para todos los tipos de muestras es de 7.58x107 IU/mL (8 log10 IU/mL).
Linearidad 13
La linearidad de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip se estableció en el plasma/suero y en la orina mediante la preparación de una serie de
diluciones utilizando el plásmido sintético BKV (tecnologías de ADN integrado) con una trazabilidad establecida según la 1a Norma Internacional
de la OMS para el virus BK (BKV) (14/212)9. Se crearon 11 diluciones en serie del plásmido sintético del BKV, preparadas en BaseMatrix 53
negativa al BKV o en orina humana agrupada negativa al BKV, para abarcar un rango de concentración de 8 - 1.58 log10 IU/mL para plasma/suero
550 µL y orina y un rango de concentración de 7 - 2.88 log10 IU/mL para plasma/suero 100 µL.
En las Figuras 2, 3 y 4 se presentan las concentraciones del ensayo de BKV notificadas por el sistema NeuMoDxTMen comparación con los valores
esperados.
Figura 2: Linearidad del NeuMoDxTM BKV Quant Assay para plasma/suero (flujo de trabajo de 550 µL)
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 11 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Figura 3: Linearidad del NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip para muestras de orina
Figura 4: Linearidad del NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip para plasma/suero (flujo de trabajo de 100 µL)
Linearidad entre Genotipos16
La linealidad del NeuMoDx BKV Quant Assay entre tres genotipos de BKV (Virus BK Dunlop, Virus BK Gardner, Virus BK AB269822_FIN-2) se
caracterizó probando cuatro concentraciones diferentes de cada genotipo de BKV preparado en el BaseMatrix 53 negativo al BKV. El genotipo del
virus BK S72390 no presenta polimorfismos en la región objetivo del gen cubierta por la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip. El estudio se realizó
probando 4 réplicas de cada uno de los 3 genotipos a 6 concentraciones (serie de dilución de 10 veces). La linearidad a través de tres genotipos
de BKV se presenta en la Tabla 6 y Figura 5.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 12 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Tabla 6: Linearidad del NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip entre Genotipos
Ecuación de linearidad
Genotipo y = NeuMoDx BKV Assay Ct R2
x = Series de dilución
Virus BK Dunlop y = -3.4808x + 0.8595 0.9926
Virus BK Gardner y = -3.4682x + 0.6395 0.9959
Virus BK AB269822_FIN-2 y = -3.432x + 1.2683 0.9947
Figura 5: Linearidad del NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip entre Genotipos
Especificidad Analítica – Reactividad Cruzada 10,11
La especificidad analítica se demostró mediante el examen de 22 organismos que se encuentran comúnmente en muestras de plasma/suero u
orina, así como de especies filogenéticamente similares al BKV para determinar su reactividad cruzada. Los organismos se prepararon en grupos
de entre 5 y 6 organismos y se probaron en una alta concentración. Los organismos analizados se muestran en la Tabla 7. No se observó ninguna
reactividad cruzada con ninguno de los organismos ensayados, lo que confirma el 100% de especificidad analítica del NeuMoDxTM BKV Quant
Assay.
Tabla 7: Patógenos utilizados para demostrar la especificidad analítica
Organismos no objetivo
Enterococcus Staphylococcus Streptococcus Streptococcus
HTLV-1/2 Klebsiella pneumonia
faecalis aureus pneumoniae pyogenes
Staphylococcus Virus de Epstein- Virus Hepatitis C
Virus Hepatitis B Adenovirus tipo 5 Virus Varicela-Zoster
epidermidis Barr
Virus de la
Virus del Herpes Virus del herpes Virus del herpes Virus del herpes
Virus Hepatitis C Inmunodeficiencia
Simplex tipo 2 humano tipo 6 humano tipo 7 humano tipo 8
Humana-1
Virus de la
Inmunodeficiencia Virus JC SV40 Citomegalovirus
Humana-2
Especificidad analítica – Sustancias interferentes, organismos comensales 10,11
El NeuMoDxTM BKV Quant Assay se evaluó para determinar si había interferencias en presencia de organismos no objetivo utilizando los mismos
grupos de organismos preparados para las pruebas de reactividad cruzada que figuran en el cuadro 7. El plasma de BKV negativo se enriqueció
con los organismos agrupados en grupos de 4-7, y también se enriqueció con el BKV objetivo a una concentración de 4 log10 IU/mL. No se
observó ninguna interferencia significativa en presencia de estos organismos comensales, como lo indica la mínima desviación de la
cuantificación de las muestras de control que no contenían ningún agente de interferencia.
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 13 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Especificidad Analítica – Sustancias interferentes, sustancias endógenas y exógenas 10,11
El NeuMoDxTM se evaluó en presencia de las típicas sustancias de interferencia exógena y endógena que se encuentran en las muestras clínicas
de plasma/suero u orina del BKV. Entre ellas se incluían niveles anormalmente altos de componentes de sangre u orina, así como medicamentos
antivirales comunes, que se clasifican en la tabla 8. Cada sustancia se añadió a la BaseMatrix 53 negativa al BKV o a la orina humana enriquecida
con 3 log10 IU/mL de BKV y las muestras se analizaron para detectar interferencias. En la Tabla 9 se indica la concentración media y el sesgo de
todas las sustancias analizadas en comparación con las muestras de control enriquecidas con el mismo nivel de BKV. Ninguna de las sustancias
exógenas y endógenas afectó la especificidad del NeuMoDxTM BKV Quant Assay.
Tabla 8: Pruebas de interferencia - Agentes exógenos (Clasificación de fármacos)
Grupo Nombre del fármaco Clasificación
Valganciclovir ANTIVIRAL
Prednisona INMUNOSUPRESOR
Grupo 1 Cidofovir ANTIVIRAL
Cefotaxima ANTIBIÓTICO
Mofetil micofenolato INMUNOSUPRESOR
Vancomicina ANTIBIÓTICO
Tacrolimus INMUNOSUPRESOR
Grupo 2 Famotidina ANTAGONISTA DE LA HISTAMINA
Valacyclovir ANTIVIRAL
Leflunomida INMUNOSUPRESOR
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 14 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Tabla 9: Pruebas de interferencia - Agentes exógenos y endógenos
Concentración media Sesgo
Endógeno (Plasma/Suero)
log10 IU/mL log10 IU/mL
Triglicéridos (500 mg/dL) 3.09 0.16
Bilirrubina conjugada (0.25 g/L) 3.09 0.16
Bilirrubina no conjugada (0.25 g/L) 3.31 -0.06
Albumina (58.7 g/L) 3.12 0.13
Hemoglobina (2.9 g/L) 3.02 0.23
Concentración media Sesgo
Endógeno (Orina)
log10 IU/mL log10 IU/mL
Urobilirrubina (> 2 mg/dL) 3.74 -0.14
Glucosa (1000 mg/dL) 4.00 0.04
Orina pH 4 3.75 0.29
Orina pH 10 3.77 0.27
Leucocitos (1E5 células/mL) 3.68 -0.20
Sangre 7% 4.42 -0.46
Proteína (albumina >100 mg/dL) 3.96 0.08
Polvo de talco 3.92 0.12
Concentración media Sesgo
Exógeno (Fármaco)
log10 IU/mL log10 IU/mL
Grupo 1: Valganciclovir, Prednisona, Cidofovir,
4.04 -0.06
Cefotaxima, Mofetil micofenolato
Grupo 2: Vancomicina, Tacrolimus, Famotidina,
4.07 -0.09
Valaciclovir, Leflunomida
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 15 de 18NeuMoDx™ BKV Quant Test Strip 201800
INSTRUCCIONES DE USO
Repetibilidad y precisión en el laboratorio14
La precisión de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip fue determinada probando 2 réplicas de un panel de 5 miembros de muestras de BKV
preparadas con plásmido de BKV dos veces al día, usando un sistema NeuMoDxTM 96 entre 20 días. Se caracterizaron las precisiones en un ciclo
de análisis y en un día, y se determinó que la desviación estándar general era ≤ 0.30 log10 IU/mL. Se demostró una excelente precisión entre días
y ciclos, como se muestra en la Tabla 10. No se caracterizó la precisión entre los operadores, ya que el operador no desempeña un papel
significativo en el procesamiento de las muestras con el sistema NeuMoDxTM.
Tabla 10: Precisión en laboratorio – NeuMoDx BKV Quant Assay en Sistemas NeuMoDx
DE total (en el
DE en un día DE en un ciclo
Muestra laboratorio)
(log10 IU/mL) (log10 IU/mL)
(log10 IU/mL)
Muestra de Plasma/Suero (550 µL)
7 log10 IU/mL 0.09 0.10 0.12
4 log10 IU/mL 0.13 0.14 0.16
3 log10 IU/mL 0.11 0.13 0.16
2 log10 IU/mL 0.10 0.15 0.20
0 log10 IU/mL 0.00 0.00 0.00
Muestra de orina (550 µL)
7 log10 IU/mL 0.14 0.17 0.19
4 log10 IU/mL 0.15 0.20 0.21
3 log10 IU/mL 0.14 0.13 0.16
2 log10 IU/mL 0.15 0.21 0.27
0 log10 IU/mL 0.00 0.00 0.00
Reproducibilidad de lote a lote 14
La reproducibilidad lote a lote de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip se determinó usando tres lotes diferentes de NeuMoDxTM BKV Quant Test
Strips. Se utilizó un panel de 5 miembros de BKV preparado con el plásmido BKV para evaluar el rendimiento en un NeuMoDx™ 96 Molecular
System a través de 3 ciclos separados. Se analizó la variación dentro y a través de los lotes y los resultados se expresaron como un sesgo de
cuantificación absoluta entre los lotes, que se presenta en la Tabla 11. El sesgo general máximo fue de 0.27 log10 IU/mL. Se demostró un
rendimiento equivalente entre los lotes ya que la cuantificación de todos los miembros del panel estaba dentro de la especificación de la
tolerancia.
Tabla 11: Reproducibilidad de lote a lote – NeuMoDx BKV Quant Assay
Sesgo absoluto Sesgo absoluto Sesgo absoluto
entre Lote 1 y entre Lote 1 y entre Lote 2 y
Muestra
Lote 2 Lote 3 Lote 3
(log10 IU/mL) (log10 IU/mL) (log10 IU/mL)
Muestra de Plasma/Suero (550 µL)
7 log10 IU/mL 0.05 0.10 0.05
4 log10 IU/mL 0.02 0.03 0.05
3 log10 IU/mL 0.20 0.05 0.15
2 log10 IU/mL 0.02 0.24 0.26
0 log10 IU/mL 0.00 0.00 0.00
Muestra de orina (550 µL)
7 log10 IU/mL 0.09 0.27 0.19
4 log10 IU/mL 0.25 0.06 0.19
3 log10 IU/mL 0.06 0.08 0.14
2 log10 IU/mL 0.03 0.11 0.14
0 log10 IU/mL 0.00 0.00 0.00
Reproducibilidad de instrumento a instrumento14
La reproducibilidad de instrumento a instrumento de la NeuMoDxTM BKV Quant Test Strip se determinó utilizando tres sistemas diferentes (dos
NeuMoDx™ 288 Molecular System y un NeuMoDx™ 96 Molecular System).). Para evaluar el rendimiento se utilizó un panel de 5 miembros de
BKV preparado con el plásmido BKV. Las pruebas se realizaron en paralelo en los sistemas durante 5 días. Se caracterizó la variación dentro del
día y entre los sistemas, y se determinó que la desviación estándar general era ≤ 0.30 log10 IU/mL. Se demostró un rendimiento equivalente en
NeuMoDx Molecular, Inc. 201800-1.0/05 2020/07/22
Pg. 16 de 18También puede leer
