Lineamientos para la vigilancia epidemiológica de dengue por laboratorio - Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológicos "Dr. Manuel ...
←
→
Transcripción del contenido de la página
Si su navegador no muestra la página correctamente, lea el contenido de la página a continuación
Dirección General de Epidemiología
lineamientos para la vigilancia epidemiológica
de dengue por laboratorio
Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológicos
“Dr. Manuel Martínez Báez”
LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA
DE DENGUE POR LABORATORIO
DGE-InDRE–RNLSP
2015
Fotografía de la portada es propiedad de HKS Arquitectos
1
PRIMERA EDICIÓN, 2015
DENGUE–RNLSP
ESTE DOCUMENTO ESTÁ AVALADO POR LOS REPRESENTANTES DE LAS INSTITUCIONES QUE
CONFORMAN EL GRUPO TÉCNICO INTERINSTITUCIONAL DEL COMITÉ NACIONAL PARA LA
VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA (CONAVE).
TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS CONFORME A LA LEY
© INDRE-SECRETARÍA DE SALUD
SE PERMITE LA REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL SI SE CITA LA FUENTE: “LINEAMIENTOS
PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE DENGUE POR LABORATORIO” VERSIÓN NO. 01.
INDRE, 2015.
COLECCIÓN PUBLICACIONES TÉCNICAS DEL INDRE
ISBN: EN PROCESO
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS DR. MANUEL MARTÍNEZ
BÁEZ
FRANCISCO P MIRANDA 177, COL. LOMAS DE PLATEROS DEL. ÁLVARO OBREGÓN, C. P.
01480, MÉXICO, D. F.
WWW.INDRE.SALUD.GOB.MX
TEL. (55)53-42-75-50
LA EDICIÓN ESTUVO A CARGO DE: DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
EL DISEÑO ESTUVO A CARGO DE: LIC. BRENDA ESCOBEDO LÓPEZ
IMPRESO EN MÉXICO. PRINTED IN MEXICO
2
SECRETARÍA DE SALUD
DRA. MERCEDES JUAN LÓPEZ
SECRETARIA DE SALUD
DR. EDUARDO GONZÁLEZ PIER
SUBSECRETARIO DE INTEGRACIÓN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD
DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES
SUBSECRETARIO DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN DE LA SALUD
LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZÁLEZ
SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIÓN Y FINANZAS
DR. GABRIEL O´SHEA CUEVAS
COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIÓN SOCIAL EN SALUD
LIC. MIKEL ARRIOLA PEÑALOZA
COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIÓN CONTRA RIESGOS SANITARIOS
DR. JOSÉ MELJEM MOCTEZUMA
COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MÉDICO
DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS
TITULAR DE LA COMISIÓN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y
HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD
LIC. RODRIGO REINA LICEAGA
TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIÓN Y PARTICIPACIÓN SOCIAL
DR. NELLY AGUILERA ABURTO
TITULAR DE LA UNIDAD DE ANÁLISIS ECONÓMICO
LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA
DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIÓN SOCIAL
DR. JESÚS FELIPE GONZÁLEZ ROLDAN
DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL
DE ENFERMEDADES
DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE
DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIÓN DE LA SALUD
DR. CUITLÁHUAC RUIZ MATUS
DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGÍA
3
LIC. JUAN CARLOS REYES OROPEZA
DIRECTOR GENERAL DE INFORMACIÓN EN SALUD
4INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS
DR. MANUEL MARTÍNEZ BÁEZ
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA
QFB. LUCÍA HERNÁNDEZ RIVAS
DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TÉCNICO
LIC. ADRIANA CASTRO CABRERA
SUBDIRECTORA DE OPERACIÓN
BIOL. NORMA ANGÉLICA MONTES COLIMA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA
QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY
ASESORA TÉCNICA DE LA DIRECCIÓN
M. EN C. BELÉN TORRES LONGORIA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGÍA
QFB. ROBERTO VÁZQUEZ CAMPUZANO
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIAS
M. EN C. JUAN CARLOS CARPIO PEDROZA
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA
DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA
M. EN C. JUDITH ESTEVEZ RAMÍREZ
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS
DR. JOSÉ ERNESTO RAMÍREZ GONZÁLEZ
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y VALIDACIÓN DE TÉCNICAS
M. EN C. MAURICIO VÁZQUEZ PICHARDO
COORDINADOR DE ENFERMEDADES VIRALES ZOONÓTICAS Y POR VECTOR
5GRUPO DE TRABAJO
M. EN C. MAURICIO VÁZQUEZ PICHARDO
COORDINADOR DE ENFERMEDADES VIRALES ZOONÓTICAS Y POR VECTOR
QFB. CLAUDIA ROSALES JIMÉNEZ
ADSCRITA AL LABORATORIO DE ARBOVIRUS Y VIRUS HEMORRÁGICOS
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA
DR. HUGO MARTÍNEZ ROJANO
ASESOR TÉCNICO DE LA DIRECCIÓN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE
COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
6LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA DE DENGUE POR
LABORATORIO
DGE-InDRE–RNLSP
2015
7ÍNDICE
INTRODUCCIÓN 9
ANTECEDENTES DE LA RNLSP PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE 10
MARCO LEGAL 12
DEFINICIONES OPERATIVAS 12
OBJETIVO GENERAL 14
Objetivos específicos 14
RED NACIONAL DE LABORATORIOS PARA LA VIGILANCIA DE DENGUE 15
Organización de la Red Nacional de Laboratorios para el Diagnóstico de Dengue15
Funciones de los integrantes de la Red Nacional de Laboratorios para el
Diagnóstico de Dengue 16
Funciones del laboratorio nacional de referencia 16
Funciones de los laboratorios estatales de salud pública 17
DIAGNÓSTICO DE DENGUE POR LABORATORIO 18
Toma, manejo y envío de muestras clínicas 18
Algoritmo de laboratorio para el diagnóstico de dengue 20
ESTÁNDAR DE CALIDAD 29
Captura de datos y resultados 31
PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO (PEED) 34
Criterios para la liberación del diagnóstico 39
Banco de material biológico 40
Indicaciones para la detección e identificación de serotipos de virus dengue
mediante RT-PCR Multiplex en tiempo real 40
1) Laboratorios estatales que aún no realizan RT-PCR Multiplex en tiempo real
para detección e identificación de serotipos de virus dengue 41
2) Laboratorios estatales que realizan RT-PCR Multiplex en tiempo real para
detección e identificación de serotipos de virus dengue 41
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 43
BIBLIOGRAFÍA 45
ANEXOS 47
I. TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS 48
Biología molecular 66
II. CARACTERÍSTICAS DE LOS ESTUCHES COMERCIALES 82
III. FORMATO PARA ENVÍO DE MATERIAL BIOLÓGICO AL InDRE 84
8INTRODUCCIÓN
A nivel mundial las enfermedades virales transmitidas por vector están
consideradas como las de mayor repercusión en Salud Pública. Actualmente la
Organización Mundial de la Salud (OMS) cataloga a las arbovirosis como problema
prioritario en salud y en 1998 fueron consideradas como la décima causa de muerte
por enfermedades infecciosas en el mundo. Existen cuatro serotipos del dengue
(DEN1, DEN2, DEN3, DEN4), la OMS estima que estos constituyen una amenaza
para el 40% de la población mundial que habita en 112 países tropicales y
subtropicales. Se considera que en la actualidad existen 50 millones de casos en
todo el mundo, de los que aproximadamente 400,000 son casos graves y 25,000
fallecen a causa de esta enfermedad.
En el Continente Americano el dengue tuvo un surgimiento importante en los
servicios de salud desde 1989, ya que el número de casos aumentó un 60% en
comparación con el lustro anterior. En México es la principal enfermedad viral
transmitida por vector.
El dengue es una enfermedad febril, transmitida por el mosco hembra hematófaga
del género Aedes aegypti, la enfermedad es de curso auto-limitado, incapacitante y
con riesgo de complicaciones letales, la cual se puede presentar de manera benigna
conocida como Fiebre por Dengue (FD) y de manera grave conocida como Fiebre
Hemorrágica por Dengue (FHD).
El presente documento establece los lineamientos de operación para la vigilancia
epidemiológica de dengue basada en laboratorio y la implementación del nuevo
algoritmo de laboratorio para el diagnóstico de dengue; la descripción de los
lineamientos incluye funciones y responsabilidades por nivel, toma, manejo y envío
de muestras, así como las metodologías para el análisis de muestras, evaluación del
desempeño, banco de muestras y los estándares de calidad.
Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública
La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública (RNLSP) es el conjunto de
laboratorios para la vigilancia epidemiológica con objetivos específicos que le han
permitido unificar métodos de diagnóstico, criterios de interpretación de
resultados, transferencia tecnológica, generación de conocimiento y formación de
recursos humanos. Es el soporte técnico-científico útil para la vigilancia
epidemiológica y que genera información de calidad para la toma oportuna de
decisiones a través de la confirmación de diagnósticos mediante estudios de
laboratorio en muestras biológicas.
La RNLSP depende de la Secretaría de Salud y es el Instituto de Diagnóstico y
Referencia Epidemiológicos (InDRE) su órgano rector en el área de vigilancia
epidemiológica. Tiene fundamento legal en la Norma Oficial Mexicana NOM-017-
SSA2-2012, Para la vigilancia epidemiológica y está conformada por 31
9Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) de las 32 entidades federativas del
país (el Distrito Federal envía sus muestras al InDRE).
El Marco Analítico Básico de la RNLSP consta de 27 diagnósticos, distribuidos en
16 redes de vigilancia específica.
ANTECEDENTES DE LA RNLSP PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE
En 1995 en México se conformó la Red para el Diagnóstico de Dengue, integrada
por siete Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP). A partir de ese año el
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos del Instituto de Diagnóstico y
Referencia Epidemiológicos (InDRE), instancia del ejecutivo federal que entre
otras funciones, desarrolla y promueve acciones de aseguramiento de la calidad,
para promover la mejora continua en el desempeño técnico, ha ofrecido a la Red
cursos de capacitación, capacitaciones en servicio, supervisiones y asesorías,
incluyendo el apoyo con equipo e insumos en caso de emergencias epidemiológicas
y desastres. Actualmente apoya a los LESP con el envío de reactivos e insumos para
realizar la determinación de anticuerpos IgM, anticuerpos IgG y para la detección
de antígeno viral NS1 comerciales.
Desde 1999 el Laboratorio de Arbovirus inició un programa de control de calidad
en el que la Red enviaba al InDRE el 100% de las muestras positivas y 10% de las
muestras negativas para dengue. En el 2002 la Red Nacional de Laboratorios de
Salud Pública (RNLSP) se incorporó al Programa Caminando a la Excelencia para
evaluar el desempeño de los LESP. La evaluación del desempeño es una parte
importante del sistema de calidad y tiene como objetivo promover la calidad
analítica entre los laboratorios, ayudando a identificar errores y estimulando el
mejor desempeño de los mismos, respecto a los programas prioritarios de la salud
para fomentar su desarrollo.
En el año 2003 se inició la evaluación del desempeño para el diagnóstico serológico
de dengue mediante el envío de paneles de eficiencia y se estableció el envío
únicamente de muestras probables de Fiebre Hemorrágica por Dengue o Dengue
Grave para control de calidad o en su caso muestras con serotipo no identificado en
los últimos años en el estado. En julio de 2012 esta evaluación del desempeño se
actualizó y mejoró, al implementar paneles algorítmicos que evalúan de manera
integral el desempeño de cada LESP con respecto al algoritmo de diagnóstico
vigente y a partir de 2013 fueron incluidos los paneles algorítmicos únicos
“SMART-ONLY-DEN”.
Durante abril del 2008 el Laboratorio de Arbovirus implementó un nuevo
algoritmo de diagnóstico que incluía la detección de antígeno NS1 (glicoproteína no
estructural 1 del virus dengue) en formato de Ensayo por Inmunoabsorción Ligado
a Enzimas (ELISA); metodología que es aplicable únicamente en muestras
obtenidas durante la fase aguda de la enfermedad y que tiene el objetivo de brindar
resultados oportunos y confiables. Los resultados positivos de esta metodología
10han sido aprovechados para realizar la vigilancia virológica (tipificación del virus)
en un porcentaje de muestras mediante la Prueba de Retro-transcripción y de la
Reacción en Cadena de la Polimerasa (RT-PCR) en tiempo real.
En marzo de 2010, el Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos del InDRE
capacitó al personal de 28 laboratorios estatales que conformaban la RNLSP para
dar a conocer el protocolo “Detección y Serotipificación de Virus Dengue Mediante
RT-PCR Multiplex en tiempo real” validado por el Centro de Control y Prevención
de Enfermedades, División Dengue CDC-Dengue Branch de San Juan Puerto Rico,
con la finalidad de que cada LESP realizara la vigilancia virológica en su estado. El
seguimiento a la implementación de esta metodología se realizó mediante la
aplicación de una cédula. Durante el 2011 fueron 15 los LESP que iniciaron la etapa
de control de calidad para RT-PCR en tiempo real para dengue: Baja California Sur,
Chiapas, Guerrero, Morelos, Nuevo León, Oaxaca, Querétaro, Quintana Roo, San
Luis Potosí, Tabasco, Chihuahua, Sonora, Jalisco, Veracruz y Yucatán. A partir de
2012 se incorporaron seis LESP a la Red Nacional de Laboratorios para el
Diagnóstico de Dengue (Michoacán, Campeche, Sonora, Sinaloa, Zacatecas y
Guanajuato), contando hasta ahora con 21 LESP.
Actualmente, los estados antes mencionados cuentan con la metodología liberada
debido a que cumplieron con los parámetros de concordancia requeridos por el
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos (promedio de 95% de
concordancia en fase de control de calidad y en paneles de evaluación externa del
desempeño). Los LESP de Nayarit y Colima se encuentran en fase de control de
calidad con resultados de más del 99.5% de concordancia, motivo por el cual en los
meses siguientes recibirán la notificación de liberación de la metodología. El LESP
de Hidalgo comenzó en este año la fase de control de calidad, obteniendo un
resultado del 100% de concordancia en el panel “SMART-ONLY-DEN” 2013-01. Así
mismo el LESP de Chihuahua ya cuenta con la implementación de la metodología,
pero por ser un estado no endémico y no tener muestras positivas al antígeno NS1,
la liberación de la misma estuvo basada en la aplicación de un panel para la
evaluación externa del desempeño, en el que obtuvo un resultado sobresaliente
(90-100% de concordancia); este mismo lineamiento aplicará para aquellos LESP
que estén en la misma situación, como el LESP de Durango, el cual obtuvo 100% de
concordancia en el panel “SMART-ONLY-DEN” 2013-01. En caso de que el
porcentaje de concordancia del panel no cumpla con los requerimientos, la
metodología no será liberada. Esto último permitirá que dichos estados tengan
habilitados los métodos analíticos y las herramientas para poder utilizarlos ante
cualquier contingencia, al presentarse casos positivos de NS1. Todos los LESP que
cuentan con la técnica diagnóstica molecular liberada son capaces de realizar la
vigilancia intencionada directamente en mosquitos trasmisores del virus (vigilancia
entomo-virológica). Esta última deberá ser realizada en completa coordinación con
el InDRE (Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos y el Laboratorio de
Entomología) y el Programa de Control de Vectores Nacional y Estatal.
11MARCO LEGAL
1. Constitución Política de los Estados Unidos Mexicanos. Artículo 4. DOF
05/02/1917, Última Reforma D.O.F. 15/02/2012.
2. Ley General de Salud. Artículo 3, XV; 59; 64, III; 133; 134, I; 136, 138, 139 y 141.
DOF 7/02/1984, Última Reforma DOF 07/06/2012.
3. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-2012, Para la vigilancia
epidemiológica. DOF: 19/02/2013.
4. Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002. Protección ambiental-
salud ambiental-residuos peligrosos biológico-infecciosos-clasificación y
especificaciones de manejo.
5. Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005, Que establece las
características, el procedimiento de identificación, clasificación y los listados de
los residuos peligrosos. DOF: 23/06/2006.
6. Norma Oficial Mexicana NOM-032-SSA2-2010 para la Vigilancia
Epidemiología, Prevención y Control de Enfermedades Transmitidas por
Vector.
7. Lineamientos para programas de evaluación externa del desempeño de la Red
Nacional de Laboratorios de Salud Pública, InDRE-Secretaría de Salud, 2013
8. Criterios de Operación para la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública,
DGE-InDRE-RNLSP, Secretaría de Salud, 2013.
9. Secretaría de Salud. Programa Sectorial de Salud 2013-2018. Diario Oficial de la
Federación DOF: 12/12/2013.
10. Plan Nacional de Desarrollo 2013-2018. Diario Oficial de la Federación, DOF:
20/05/2013, www.dof.gob.mx
11. Secretaría de Salud. Programa de Acción Específico 2013-2018. Sistema
Nacional de Vigilancia Epidemiológica, primera edición 2014.
DEFINICIONES OPERATIVAS
Para los propósitos de la vigilancia epidemiológica se han elaborado definiciones
operacionales de caso, a efecto de unificar los criterios para la detección,
notificación y clasificación de los casos de dengue. La especificidad del diagnóstico
está proporcionada por los estudios de laboratorio, por lo que es importante contar
con los resultados virológicos, serológicos y de gabinete para el adecuado
seguimiento del caso hasta su clasificación final.
Según los lineamientos para la Vigilancia Epidemiológica de Fiebre por Dengue y
Fiebre Hemorrágica por Dengue, las definiciones operativas son las siguientes:
Vigilancia epidemiológica: Es el estudio permanente y dinámico del estado de
salud en la población y tiene como propósito presentar opciones para la toma de
decisiones. Desde el punto de vista operativo incluye la recopilación, el
procesamiento y el análisis de los daños y riesgos en salud.
12Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SINAVE): Corresponde a
la Dirección General Adjunta de Epidemiología (DGAE) coordinar la elaboración
de las normas y procedimientos para la vigilancia epidemiológica correspondiente.
El SINAVE capta, registra y analiza datos de morbilidad, mortalidad y daños, así
como riesgos a la salud, en este caso, específicamente para dengue a través del
Sistema Único de Información para la Vigilancia Epidemiológica (SUIVE), apoyado
a su vez en:
- La notificación semanal de casos nuevos de enfermedades
- Los sistemas especiales de vigilancia epidemiológica
- El Sistema Epidemiológico y Estadístico de las Defunciones (SEED)
Caso sospechoso de Fiebre por Dengue o Dengue no Grave: Toda persona
de cualquier edad que resida o proceda de una región en la que haya transmisión
de la enfermedad y que presente cuadro febril inespecífico o compatible con
infección viral.
Caso probable de Fiebre por Dengue o Dengue Grave: Todo caso
sospechoso que presente fiebre y dos o más de las siguientes características:
cefalea, artralgias, mialgias, exantema, dolor reto-ocular. En menores de 5 años, el
único signo a considerar puede ser la fiebre.
Caso confirmado de Fiebre por Dengue o Dengue no Grave: Todo caso
probable en el que se confirme infección reciente por virus de dengue mediante
técnicas de laboratorio, esté asociado epidemiológicamente a otro caso confirmado
o no se disponga de resultado de laboratorio.
Caso probable de Fiebre Hemorrágica por Dengue o Dengue grave: Toda
persona que además de un cuadro probable de Fiebre por Dengue, desarrolle fiebre
y una o más de las siguientes características: datos de fuga de plasma, o datos de
fragilidad capilar, o hemorragias, o trombocitopenia menor a 100,000 plaquetas
por mm3 o hemoconcentración con uno a más de los siguientes datos: incremento
del hematocrito en un 20% o más en la fase aguda; decremento de hematocrito en
al menos 20% después del tratamiento; tendencia del hematocrito en muestras
secuenciales (por ejemplo 40, 43, 45 etc.); relación hematocrito/hemoglobina
sugestivo 3.2 a 3.4, indicativo 3.5 o mayor; o hipoalbuminemia.
Caso confirmado de Fiebre Hemorrágica por Dengue o Dengue grave:
Toda persona con cuadro probable de Fiebre Hemorrágica por Dengue confirmado
por laboratorio que además presente lo siguiente:
Datos de fuga de plasma, con al menos los siguientes datos:
Clínica: edema, piel moteada, ascitis o derrame pleural
Laboratorio: elevación del 20% en etapa aguda o disminución del 20% en
etapa de convalecencia o elevación del hematocrito o hemoglobina en forma
secuencial (a partir del tercer día) o hipoalbuminemia.
13 Gabinete: ultrasonido (líquido peri-visceral y en cavidad abdominal o
torácica) o radiología (derrame pleural o ascitis).
Datos de fragilidad capilar: prueba de torniquete positiva (petequias,
equimosis, hematomas), trombocitopenia menor a 100,000 plaquetas por
mm3.
Caso probable de Síndrome de Choque por Dengue (SCHD) o Dengue
Grave: Toda persona con cuadro de FD o FHD y que presente súbitamente datos
de insuficiencia circulatoria, alteraciones en el estado de conciencia, tensión
arterial disminuida o estado de choque profundo.
Caso confirmado de Síndrome de Choque por Dengue o Dengue Grave:
Todo caso probable de SCHD en el que se confirme infección reciente por virus de
dengue mediante técnicas de laboratorio.
OBJETIVO GENERAL
Establecer los procedimientos para la implementación del nuevo algoritmo de
laboratorio para el diagnóstico de Fiebre por Dengue (FD) y Fiebre Hemorrágica
por Dengue (FHD).
Objetivos específicos
Brindar información oportuna y veraz al Sistema Nacional de Vigilancia
Epidemiológica (SINAVE).
Establecer el manejo adecuado de la información generada por laboratorio,
para la toma de decisiones y acciones a través de la RNLSP.
Realizar una rectoría a nivel nacional respecto al diagnóstico de dengue por
laboratorio, que indique claramente funciones y responsabilidades en cada
nivel.
Conformar una Red Nacional de Laboratorios para el Diagnóstico de Dengue
con personal altamente capacitado y con metodologías de actualidad, capaz de
responder oportunamente cualquier contingencia a nivel nacional.
14RED NACIONAL DE LABORATORIOS PARA LA VIGILANCIA DE DENGUE
Figura. 1. Marco analítico para el diagnóstico serológico y molecular de
dengue (31 estados)
Los estados de color rojo son aquellos que cuentan con la metodología
implementada de RT-PCR Multiplex en tiempo real y los de color blanco están en
fase de implementación. La estrella color azul indica la implementación de
aislamiento viral.
Los estados de color verde cuentan con la detección serológica básica mediante
detección de antígeno NS1 y anticuerpos IgM y/o IgG.
Organización de la Red Nacional de Laboratorios para el Diagnóstico
de Dengue
El marco analítico de la Red Nacional de Laboratorios para el Diagnóstico de
Dengue está conformado por el diagnóstico serológico (31 LESP realizan
determinación de anticuerpos IgM y determinación de antígeno NS1; 23 realizan
también determinación de IgG, como marcador de reinfecciones activas,
únicamente en regiones endémicas); todos los LESP tienen liberadas las tres
metodologías serológicas.
Los LESP de Sonora y Veracruz realizan aislamiento viral e identificación de
serotipos por Inmunofluorescencia, y 21 LESP tienen implementada y liberada la
vigilancia virológica mediante RT-PCR en tiempo real. Actualmente los estados de
Coahuila, Estado de México y Puebla, están en fase de implementación y control de
calidad de la vigilancia virológica mediante RT-PCR. Los estados de
Aguascalientes, Baja California y Tlaxcala, debido a la ausencia del vector, no están
considerados para la implementación de la vigilancia virológica; en el Distrito
15Federal, el InDRE lleva a cabo cualquier identificación de casos importados que
viajaron a zonas endémicas de la enfermedad.
Figura. 2. Flujo de trabajo de la Red Nacional de Laboratorios para el
Diagnóstico de Dengue
Funciones de los integrantes de la Red Nacional de Laboratorios para
el Diagnóstico de Dengue
Funciones del laboratorio nacional de referencia
El Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos del InDRE es el laboratorio
nacional de referencia y el rector normativo para el diagnóstico de dengue en
México. Las funciones que le competen son las siguientes:
Proporcionar servicios confiables de diagnóstico, referencia y control de calidad
de dengue, dentro de los estándares de servicio indicados y ser el laboratorio de
excelencia y líder.
Coordinar la Red Nacional de Laboratorios para el Diagnóstico de Dengue
mediante un verdadero análisis de la información generada.
16 Promover una visión objetiva y autocrítica, que permita la detección de áreas de
oportunidad para implementar mejoras continuas en la determinación de
anticuerpos IgM, IgG y antígeno NS1, aislamiento y detección molecular de
dengue y otros arbovirus.
Mantener y mejorar algoritmos de diagnóstico y referencia.
Incorporar nuevas metodologías para el diagnóstico diferencial de dengue y
otros arbovirus.
Reglamentar los criterios de interpretación de resultados, que permitan generar
resultados confiables para la toma de decisiones.
Monitorear continuamente el desempeño de la Red Nacional de Laboratorios
para el Diagnóstico de Dengue, mediante la aplicación de los paneles de
evaluación externa del desempeño.
Realizar capacitación en el servicio para la formación de recursos humanos
altamente capacitados en el diagnóstico de dengue.
Supervisar y asesorar directamente a los LESP.
Desarrollar la investigación operativa y el desarrollo tecnológico que sea
aplicable, en apoyo al SINAVE.
Funciones de los laboratorios estatales de salud pública
Realizar procesos analíticos para la detección de infecciones causadas por
dengue.
Asegurar la calidad del diagnóstico en el laboratorio, mediante los
procedimientos, métodos y técnicas que el InDRE promueve.
Emitir en tiempo y forma los resultados de los exámenes de laboratorio.
Referir muestras al InDRE para diagnóstico, referencia y control de calidad.
Referir muestras del banco de sueros al InDRE para mantener los paneles de
evaluación externa del desempeño.
Generar evidencia y notificar oportunamente al órgano normativo estatal y/o
nacional los casos confirmados y descartados.
Participar como mecanismo de apoyo técnico, proporcionando la información
relacionada y requerida por el programa sustantivo del área de su competencia.
Seleccionar las muestras para control de calidad del área de influencia del
LESP.
Compilar las muestras de las jurisdicciones y redes de apoyo.
Capacitar a epidemiólogos estatales, jurisdiccionales y a todo personal o
institución del Sector Salud que lo demande en relación con la toma, manejo y
17envío de muestras mediante el monitoreo del desempeño en el área de
influencia.
Recabar, analizar y evaluar la información sobre la prestación de servicios de
diagnóstico de dengue en su estado.
Supervisar el manejo del equipo asignado al laboratorio conforme a lo
establecido en los documentos autorizados y manuales de operación
correspondientes para el aseguramiento de la calidad en la red estatal.
Proporcionar información de importancia mediante informes, notas
informativas o reportes para que sea difundida a las instancias estatales y
nacionales correspondientes contribuyendo a la vigilancia epidemiológica
estatal y nacional de manera veraz y oportuna.
Promover la capacitación continua del personal operativo.
Colaborar y/o elaborar trabajos de investigación operativa que proporcione
información prioritaria estatal, una vez que los protocolos sean aceptados por
los comités de investigación.
Participar en la elaboración y actualización de los manuales técnicos referentes
a diagnóstico y temas especializados (bioseguridad, manejo de residuos
peligrosos biológico-infecciosos, etc.) para uso en el ámbito estatal y local.
DIAGNÓSTICO DE DENGUE POR LABORATORIO
Toma, manejo y envío de muestras clínicas
Para el diagnóstico de dengue por laboratorio es necesario contar con suero del
paciente, el cual es obtenido a través de una muestra de sangre completa extraída
por venopunción, en una cantidad aproximada de 5 mL sin usar anticoagulante; 2.5
mL de suero obtenido deberá ser enviado inmediatamente al LESP para realizar los
ensayos correspondientes[1]. La muestra debe mantenerse siempre en refrigeración
1El sistema básico de triple embalaje consiste en la utilización de un recipiente primario,
en el cual está contenida la muestra biológica (exudado faríngeo, exudado nasofaríngeo,
lavado bronquio alveolar, biopsia, suero, etc.), el recipiente primario (p. ej. criotubos,
tubos o frascos con tapa de rosca) debe ser hermético para evitar que la muestra se
derrame y tiene que estar perfectamente etiquetado con el nombre o número de muestra
del paciente. El recipiente primario deberá rodearse de material absorbente como gasa o
papel absorbente y colocarse en un recipiente secundario hermético a prueba de derrames
y golpes. Si se colocan varios recipientes primarios dentro de un recipiente secundario se
deberá usar una gradilla y material absorbente para evitar algún derrame. Es importante
mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera) tiene que haber suficientes
refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8 °C. Los recipientes secundarios
deberán llevar las etiquetas de riesgo biológico y señal de orientación del recipiente, a su
vez el recipiente secundario deberá ir contenido en un paquete externo de envío (caja de
cartón o hielera) que proteja el contenido de elementos externos del ambiente y debe estar
18de 2-8 °C desde el momento de la toma hasta su llegada al LESP. La muestra
deberá venir acompañada con el Formato Único de Envío de Muestras Biológicas
(REMU-F12) del InDRE, o con el Formato de Enfermedades Transmitidas por
Vector o en su caso con el Formato de Informe de Seguimiento de Fiebre por
Dengue y Dengue Hemorrágico el cual se genera automáticamente de la plataforma
para dengue, con toda la información solicitada, sin datos alterados o sobrescritos,
y si es el caso, es conveniente que se indique la gravedad del paciente; las muestras
que no cumplan con los requisitos establecidos en el Manual para la Toma, Envío y
Recepción de Muestras para Diagnóstico (REMU-MA-01), serán rechazadas sin
ninguna excepción. Como todos los LESP ya capturan en el Sistema de Plataforma
Única para Dengue se tiene que adjuntar un listado nominal de las muestras
enviadas, indicando el folio del SINAVE, de lo contrario las muestras no serán
aceptadas.
De acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-032-SSA2-2010, Para la
Vigilancia Epidemiológica, Prevención y Control de las Enfermedades Transmitidas
por Vector, las técnicas alternativas para confirmar o descartar un caso probable en
los primeros días de haber iniciado con la fiebre (0-5 días) son las técnicas
virológicas para detectar y tipificar al virus (aislamiento viral en cultivo de células e
identificación por inmunofluorescencia indirecta) o las moleculares (RT-PCR en
tiempo real o punto final). A finales del año 2006, apareció una alternativa
analítica en formato de ELISA más fácil, rápida y oportuna para aplicar en los
primeros días de evolución de la enfermedad. Esta técnica se basa en la
identificación de la glicoproteína no estructural 1 del virus dengue (NS1), implicada
en los procesos de replicación viral, la cual es secretada por el virus, lo que permite
su detección en la muestra de suero en fase aguda de la enfermedad. Esta técnica
tiene reportada una sensibilidad entre el 80-100% (dependiente del serotipo y
genotipo responsable de la infección, además de la presencia de altas
concentraciones de anticuerpos IgM o IgG) y una especificidad de 100% y que
conjuntamente con las técnicas comerciales ya existentes para determinación de
IgM (sensibilidad de 94.7% y especificidad del 97.2%) y para determinación de IgG
de segundas infecciones o reinfecciones por serotipos distintos (sensibilidad del
94.5% y especificidad del 97.3%) serán las pruebas consideradas como básicas en la
implementación del nuevo algoritmo.
Para realizar los tres ensayos inmunoenzimáticos se necesita contar con: un
gabinete de bioseguridad tipo II, un lector de ELISA para placas completas con un
filtro de 450 nm y otro de referencia entre 600-650 nm, un lavador para placas
completas, una incubadora o baño María (28-37 °C) y micropipetas multicanales y
sencillas con diferentes volúmenes, además de todo el material requerido no
incluido en los estuches de diagnóstico. Los procedimientos se deben realizar como
etiquetado con los datos del remitente, destinatario y señal de orientación. La
documentación que se integre al triple embalaje deberá colocarse en la parte interior del
paquete.
19lo indican las técnicas correspondientes para poder cumplir con la validación de
cada ensayo.
Es importante aclarar que las muestras a procesar por cualquiera de estas técnicas
se deben manejar en estricta red fría, es decir que no deben permanecer a
temperatura ambiente, para lo cual se sugiere sacar las muestras del refrigerador
hasta el momento de realizar cada procedimiento y una vez terminado el uso de las
mismas se deben mantener almacenadas a 4 °C. De ser posible, se recomienda que
para el manejo de las muestras (ya sea al momento de rotularlas, usarlas en cada
técnica y separar en alícuotas) se coloque la gradilla sobre una cama de hielo o de
refrigerantes congelados. En caso de manejar un gran número de muestras por
corrida (arriba de 50), deberá hacerse en bloques de 25 o 30 muestras para
asegurar la red fría y se deberán cambiar los congelantes y el hielo durante cada
bloque.
El énfasis para el manejo de muestras en estrictas condiciones de red fría radica en
aumentar las posibilidades de aislamiento viral y detección de material genético, ya
que los cambios de temperatura promueven la degradación de las proteínas de
superficie de la partícula viral, así como para evitar la degradación del ARN (ácido
ribonucleico) del virus que es altamente termolábil e inestable.
Algoritmo de laboratorio para el diagnóstico de dengue
El algoritmo propuesto para el diagnóstico de dengue deriva de tres premisas
básicas:
1) La necesidad de mejorar el porcentaje de casos confirmados por laboratorio
con respecto a los casos probables utilizando una sola muestra.
2) La necesidad de contar con un diagnóstico oportuno, que promueva una
completa y mejor vigilancia virológica en el país. La implementación del
algoritmo apoyará el Programa Nacional de Prevención y Control del Dengue
al contar con información veraz, oportuna y de calidad para iniciar las
intervenciones adecuadas.
3) Identificar aquellas muestras que no son dengue y promover el diagnóstico
diferencial.
Este algoritmo fue consensuado en cuatro diferentes reuniones celebradas en
México entre los laboratorios de la RNLSP y el InDRE. También fue sometido a la
crítica de expertos internacionales en la reunión Américas Dengue Prevention
Board–Dengue Surveillance, celebrada en la Ciudad de México del 17 al 19 de
enero de 2008. Durante los días 26 al 29 de febrero del mismo año se realizó, en
instalaciones del InDRE, el “Taller teórico-práctico para la implementación del
nuevo algoritmo para el diagnóstico por laboratorio para dengue”, el cual fue
dirigido a los 31 laboratorios estatales que conforman la RNLSP. Los últimos
comentarios se discutieron durante la visita de evaluación del Programa Nacional
de Prevención y Control del Dengue en México por parte de la Organización
Panamericana de la Salud, del 24 de marzo al 2 de abril de 2008. La solicitud por
20parte del InDRE a la RNLSP fue iniciar la implementación del algoritmo a partir
del mes de abril de 2008.
Este algoritmo involucra la calidad y la oportunidad de la información generada
por el componente de laboratorio que coadyuva en la prevención y control del
dengue; el algoritmo se muestra en la figura 3.
Figura. 3. Algoritmo de laboratorio para el diagnóstico de dengue.
Clave de tabulador: 1A3512001, 1A3512002, 1A3512003 y 1A3512004
El algoritmo involucra tres técnicas serológicas básicas: NS1, IgM e IgG. La
determinación de antígeno NS1 aplica únicamente en fase aguda de la enfermedad;
las determinaciones de anticuerpos IgM e IgG son aplicadas en la fase aguda y
convaleciente. La vigilancia virológica deberá ser aplicada en al menos el 10% de las
muestras de FD NS1+ y en el 100% de las FHD NS1+ en los LESP que tengan
liberada la metodología y para los que no cuenten con ella, deberán enviarlas al
InDRE para tipificación. Todas las muestras para diagnóstico diferencial deberán
cumplir con definición de caso para cada agente etiológico a estudiar.
21Algoritmo diagnóstico serológico
A. Muestras recibidas en el laboratorio entre 0-5 días de haber
iniciado la fiebre
Resultado
Metodología serológica
Positivo Negativo
E l laboratorio reportará el
Confirma caso. El laboratorio
resultado y se realizará la
reportará este resultado y se dará por
siguiente prueba indicada
D eterminación del antígeno viral (NS1) terminado el algoritmo. NO se
en el algoritmo: ELISA
realizará ninguna otra prueba ni se
por ELISA para IgG (cuando la
reportará ningún otro resultado (a
(Platelia BIORAD, Catálogo 72830 o muestra tenga 0-3 días de
excepción del serotipo identificado por
Early ELISA NS1 Inverness M edical iniciada la fiebre) o
RT-PCR, si es que fue seleccionada
Innovations, Catálogo E-DEN02P) ELISA para IgM
para la vigilancia virológica). E l valor
(cuando la muestra tenga
reportado que representa a un positivo
4-5 días de iniciada la
es mayor o igual a 1.0 unidad.
fiebre).
Confirma caso. El laboratorio
D eterminación de IgM por ELISA reportará este resultado y se dará por
terminado el algoritmo. NO se
(Panbio No. catálogo E-DEN01M ), E l laboratorio reportará el
realizará ninguna otra prueba ni se
únicamente para las muestras que resultado y realizará la
reportará ningún otro resultado. E l
tengan entre 4-5 días de haber iniciado determinación de IgG.
valor reportado que representa a un
la fiebre. positivo es mayor o igual a 11.0
unidades.
Confirma caso. Este resultado precisa
que bajo el diseño de la prueba,
permite identificar concentraciones E l laboratorio reportará
muy altas del marcador a analizar, que este resultado, asegurando
representan infección reciente y activa que todas las pruebas
D eterminación de IgG por ELISA como sinónimo de una reinfección antes mencionadas fueron
(Panbio, No. de catálogo E-DEN02G), por dengue pero por un serotipo realizadas y tuvieron un
únicamente para muestras que estén diferente al de la primera infección. resultado negativo. Se
entre 0-3 días, infección reciente E l laboratorio reportará este resultado dará por terminado el
(infecciones secundarias). y se dará por terminado el algoritmo. algoritmo. El valor
NO se realizará ninguna otra prueba reportado que representa
ni se reportará ningún otro resultado. a un negativo es menor o
E l valor reportado que representa a igual a 18.0 unidades.
un positivo es mayor o igual a 22.0
unidades.
Una muestra negativa a las tres pruebas previas (NS1, IgM, IgG) se considera
negativa a dengue y se deberá realizar diagnóstico diferencial para otras
arbovirosis, las muestras serán enviadas al InDRE con base en el diagnóstico
clínico y previa solicitud de vigilancia epidemiológica estatal (para casos graves y
defunciones), ya sea para identificación de flavivirus no dengue o alfa virus como:
Virus del Oeste del Nilo, Encefalitis de San Luis, Fiebre Amarilla, Encefalitis
Equina del Oeste, Encefalitis Equina del Este, Encefalitis Equina Venezolana y
Virus Chikungunya (CHIKV); además de Enfermedad Febril Exantemática,
Leptospira, Rickettsia o Hantavirus (en caso de signos hemorrágicos). En
22noviembre del 2012 la RNLSP recibió la capacitación para iniciar la realización del
diagnóstico diferencial serológico y molecular de arbovirosis y con esto comenzar a
implementar la “ARBO-RED” en México.
Ante casos de fiebre icterohemorrágica se sugiere realizar diagnóstico diferencial
con Fiebre Amarilla a personas que viajaron a zonas endémicas. En zonas
endémicas para leptospira se sugiere realizar la prueba rápida al mismo tiempo que
se inicie con el algoritmo de dengue.
Una vez que se cuente con los diagnósticos implementados se ofrecerán al SINAVE
y en el momento que este lo considere pertinente, se realizará en el InDRE la
detección ampliada para otras familias de arbovirus identificados en las Américas,
como Bunyanvirus (virus Oropuche, La Crosse), Arenavirus hemorrágicos (virus
Machupo, Guaranito, Junin, Lassa).
B. Muestras recibidas en el laboratorio con ≥6 días de haber
iniciado la fiebre
Resultado
Metodología serológica
Positivo Negativo
Confirma caso. El laboratorio
reportará este resultado, y se dará
El laboratorio reportará el
por terminado el algoritmo. NO se
D eterminación de resultado y realizará la
realizará ninguna otra prueba ni se
siguiente prueba indicada en el
IgM por ELISA reportará ningún otro resultado. El
algoritmo. En este caso será
valor reportado que representa a un
determinación de IgG.
positivo es mayor o igual a 11.0
unidades.
Confirma caso. Este resultado
precisa que bajo el diseño de la
prueba, permite identificar
concentraciones muy altas del
marcador a analizar, que El laboratorio reportará este
representan infección reciente y resultado, asegurando que las
activa como sinónimo de una dos pruebas fueron realizadas
D eterminación de reinfección por dengue pero por un y tuvieron un resultado
serotipo diferente al de la primera negativo. En este momento se
IgG por ELISA
infección. El laboratorio reportará da por terminado el algoritmo.
únicamente este resultado y se dará El valor reportado que
por terminado el algoritmo. NO se representa a un negativo es
realizará ninguna otra prueba ni se menor o igual a 18.0 unidades.
reportará ningún otro resultado. El
valor reportado que representa a un
positivo es mayor o igual a 22.0
unidades.
23Una muestra negativa a las dos pruebas previas (IgM, IgG) se considera negativa a
dengue y se deberá realizar diagnóstico diferencial, las muestras serán enviadas al
InDRE con base en el diagnóstico clínico y previa solicitud de vigilancia
epidemiológica estatal (para casos graves y defunciones), ya sea para identificación
serológica de flavivirus no dengue o alfa virus como: Virus del Oeste del Nilo,
Encefalitis de San Luis, Fiebre Amarilla, Encefalitis del Oeste, del Este y
Venezolana, y virus Chikungunya; además de Enfermedad Febril Exantemática,
Leptospira, Rickettsia o Hantavirus (en caso de signos hemorrágicos). Ante casos
de fiebre icterohemorrágica, se sugiere realizar diagnóstico diferencial con Fiebre
Amarilla a personas que viajaron a zonas endémicas. En zonas endémicas para
leptospira se sugiere realizar la prueba rápida al mismo tiempo que se inicie con el
algoritmo de dengue. Se solicitará realizar otros diagnósticos pertinentes, según
considere el SINAVE.
Resultados indeterminados
En caso de que se obtengan resultados “indeterminados” por alguna de las técnicas
mencionadas anteriormente se procederá de la siguiente forma:
Metodología serológica Resultado indeterminado
No se reportará el resultado como indeterminado y se procesará nuevamente la
D eterminación de NS1 por muestra por duplicado como lo indica la técnica, y si se obtiene el mismo
resultado (indeterminado) se realizará la siguiente prueba indicada en el
ELISA
algoritmo según corresponda. Este resultado se reportará en plataforma una
vez que esté activo el campo de resultado indeterminado.
No se reportará el resultado como indeterminado y se procesará nuevamente la
D eterminación de IgM por muestra por duplicado como lo indica la técnica y si se obtiene el mismo
resultado (indeterminado) se realizará la siguiente prueba indicada en el
ELISA
algoritmo según corresponda. Este resultado se reportará en plataforma una
vez que esté activo el campo de resultado indeterminado.
No se reportará el resultado como indeterminado y se procesará nuevamente la
muestra por duplicado como lo indica la técnica y si se obtiene el mismo
resultado (indeterminado) se enviará al InDRE para referencia ya que a partir
de septiembre se realizará inhibición de la hemaglutinación (IH ) y una vez
D eterminación de IgG por ELISA estandarizada la metodología de microneutralización (M NT) se incorporarán
las dos metodologías como referencia para estos resultados. El resultado se
reportará en plataforma una vez que esté activo el campo de resultado
indeterminado. El InDRE reportará sus resultados de referencia una vez que
en plataforma se encuentren activos los campos para IH y M NT.
Cualquier otra metodología diferente a la indicada y que no esté evaluada por el
InDRE para la vigilancia serológica, NO será considerada válida y los resultados
24obtenidos NO serán avalados, hasta no ser enviadas al InDRE las muestras de
interés.
Determinación de material genético mediante RT-PCR Multiplex
en tiempo real
Esta técnica aplica únicamente en muestras NS1 positivas que fueron
seleccionadas para su tipificación.
Resultado
Metodología serológica
Positivo Negativo
Se reportará el serotipo identificado o
serotipos identificados. El laboratorio
tendrá que informar el resultado
obtenido al remitente de la muestra El laboratorio también deberá
según sea el caso. Cabe aclarar que las informar este tipo de resultado.
muestras que resultaron positivas por Cabe aclarar que las muestras que
D eterminación mediante RT-PCR RT-PCR M ultiplex en tiempo real ya resultaron negativas por RT-PCR
habían sido confirmadas mediante M ultiplex en tiempo real ya
Multiplex en tiempo real
determinación de antígeno NS1, por habían sido confirmadas mediante
lo que deberá ser considerado como determinación de antígeno NS1,
único caso confirmado. Esta por lo que deberá ser considerado
metodología solamente tiene el como único caso confirmado.
objetivo de realizar la vigilancia
virológica de serotipos circulantes en
M éxico.
El estándar de servicio para RT-PCR es de 3 días.
En caso de extrema urgencia, los resultados deberán ser emitidos en 24 horas una
vez recibida la muestra en el Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos del
InDRE o en el LESP.
Vigilancia entomo-virológica mediante RT-PCR Multiplex en
tiempo real
Esta nueva vigilancia es consecuencia de las necesidades que han sido identificadas
por la Coordinación de Enfermedades Virales Zoonóticas y por Vector del InDRE
(CEZV-InDRE) y las exigencias que plantea la enfermedad, y son el efecto de la
implementación de la Epidemiología Inteligente basada en laboratorio que permite
coadyuvar con el programa de vectores para lograr una verdadera vigilancia
epidemiológica oportuna y preventiva. Durante 2011 se capacitaron los LESP de
Oaxaca, Morelos, San Luis Potosí, Nuevo León, Guerrero, Chiapas, Guanajuato y
Zacatecas, los cuales fueron seleccionados por contar con los componentes
25entomológicos y virológicos. En el caso de que algún otro LESP, haga saber al
InDRE que cuenta con los dos componentes, este será seleccionado para la
capacitación de vigilancia entomo-virológica. En julio de 2102 se realizó una
capacitación vía Webex a toda la RNLSP para la implementación de este tipo de
técnica.
1. Esta vigilancia será realizada únicamente por aquellos LESP que tengan
liberada la metodología de RT-PCR Multiplex en tiempo real y que cuenten
con la contraparte entomológica, los cuales se harán cargo de la captura y
clasificación de los especímenes, estos deberán ser entregados en red fría o
vivos, según sea el caso, al área responsable de la vigilancia virológica y está
podrá llevar a cabo el macerado y clarificado de los especímenes.
Este tipo de vigilancia se realizará en grupos con número de especímenes
menores a 30.
2. El tipo de muestra para la vigilancia entomo-virológica puede ser de larvas o
mosquitos adultos, de estos últimos es la más indicada.
3. En caso de captura de huevecillos, estos deberán ser cultivados para obtener
mosquitos adultos; análisis que servirá para determinar zonas con
transmisión vertical. Actualmente la CEZV-InDRE está realizando la
estandarización de la detección directa en huevecillos.
4. El LESP es el responsable de notificar inmediatamente al InDRE y al
Programa de Vectores de los resultados obtenidos, para la toma de acciones
pertinentes.
5. Como seguimiento de los resultados, el LESP deberá enviar al InDRE el 100%
de sus clarificados positivos y el 10% de los negativos, esto NO representa un
control de calidad, únicamente servirá para tener un banco de clarificados de
especímenes. El control de calidad aplicará cuando se identifique un serotipo
diferente al circulante en ese momento.
El estándar de servicio será de 5 días una vez que los especímenes sean recibidos en
los LESP.
26Aislamiento e identificación de serotipos mediante
inmunofluorescencia indirecta
Aislamiento e identificación de Resultado
serotipos Positivo Negativo
Se reportará el serotipo o serotipos
identificados. El laboratorio que
El laboratorio también deberá
cuente con la metodología
informar el resultado. Cabe
correspondiente tendrá que
mencionar que las muestras
informar el resultado obtenido al
que resultaron negativas para
remitente de la muestra, según sea
Inmunofluorescencia Indirecta aislamiento viral, ya habían
el caso. Cabe señalar que las
sido confirmadas mediante
muestras que resultaron positivas
determinación de antígeno
para aislamiento viral, ya habían
NS1, por lo que deberá ser
sido confirmadas mediante
considerado como único caso
determinación de antígeno NS1, por
confirmado.
lo que deberá ser considerado como
único caso confirmado.
Todos los resultados negativos por esta metodología deberán ser corroborados mediante
RT-PCR Multiplex en tiempo real.
Para aquellos laboratorios que estén realizando aislamiento viral como técnica para la
vigilancia virológica de dengue y que requieran de una evaluación mediante paneles por
parte del InDRE, deberán realizar la solicitud por escrito y dirigida a la Dirección de
Servicios y Apoyo del InDRE para que se les asigne un panel especial para esta
metodología.
Uso de pruebas rápidas para el diagnóstico
Durante situaciones de emergencia por brotes de dengue, como en las
inundaciones, hay sitios inaccesibles y el exceso de muestras satura al LESP, por lo
que se requiere contar con un diagnóstico oportuno y confiable y con soporte costo-
beneficio. Para ello, se propone un algoritmo que permita confirmar casos de una
forma rápida y práctica con el uso de pruebas rápidas, las cuales reportan una
sensibilidad y especificidad superior al 70%. La decisión de cuándo usar este tipo
de pruebas será con base en el Manual de Vigilancia Epidemiológica de Dengue y
debe ser definida por vigilancia epidemiológica estatal, previa autorización de la
DGAE del nivel federal. Este tipo de metodología deberá ser realizada únicamente
por los LESP. De no ser en estas situaciones se deberán realizar las pruebas
indicadas en el algoritmo vigente.
27También puede leer
