Diagnóstico microbiológico de las ITS - Amparo Broseta Tamarit Laboratorio de Microbiología - Hospital Manises
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Amparo Broseta Tamarit
Diagnóstico
Laboratorio de Microbiología
Synlab-H. de Manises
microbiológico
de las ITS
Introducción • Las infecciones de transmisión sexual (ITS):problema de Salud Pública a nivel mundial. • La OMS ha establecido una estrategia global para la reducción de las ITS entre 2016 y 2021. “La Estrategia, contribuirá a que disminuyan radicalmente las ITS y las muertes relacionadas con dichas infecciones (incluidas las muertes fetales intrauterinas y el cáncer cervicouterino), al tiempo que mejorará la salud individual, la salud sexual de los hombres y las mujeres, y el bienestar de las personas en general.
Epidemiología
500 500
450
400
350
300
290
250
200 127
150 156
87
100
50 6,3
0
C. trachomatis
Gonorrea
Sífilis
Tricomoniasis
VHS
HPV
https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/sexually-transmitted-infections-(stis)
Epidemiología
Existen más de 30 bacterias,
virus y parásitos que se
transmiten por contacto
sexual
Ocho de estos patógenos son los
principales agentes etiológicos de
ITS
Infecciones virales incurables: hepatitis B,
Infecciones curables: sífilis, gonorrea, virus del herpes simple (VHS), virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) y virus del
C. trachomatis y T. vaginalis papiloma humano (VPH)
https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/sexually-transmitted-infections-(stis)
Para el diagnóstico de las ITS, se aconseja una aproximación sindrómica, de forma que según el síndrome clínico del paciente, se utilizarán unas determinadas herramientas y técnicas microbiológicas u otras.
Impresión clínica Agente más frecuente Otros microorganismos implicados
Infecciones Ulcerativas VHS H. ducreyi
T. pallidum C. trachomatis
K. granulomatis
Infecciones supurativas - U. gonocócica: N. gonorrhoeae VHS, T. vaginalis, organismos levaduriformes,
- U. no gonocócica: C. trachomatis, M. genitalium, VPH, Adenovirus, Haemophilus spp., Neisseria
U. urealyticum meningitidis, enterobacterias.
Vulvovaginitis T. vaginalis Candida spp., enterobacterias, S. aureus, S.
pyogenes, VHS, S. agalactiae, Haemophilus spp.
Vaginosis bacteriana Prevotella spp., Mobiluncus spp., Atopobium
vaginae, Gardnerella vaginalis, Mycoplasma
- hominis, Ureaplasma urealyticum y numerosos
anaerobios fastidiosos o no cultivables (géneros
Megasphaera, Lachnospira, Sneathia, etc)
Infecciones parasitarias Sarcoptes scabiei , Phthirus pubis
Infecciones verrugosas VPH , Molluscum contagiosum
Otras Virus de las hepatitis (A, B, C), el VIH, CMV y virus
de Epstein-Barr; infección por el virus Zika y el virus
Ébola , infecciones por patógenos entéricos
(géneros Shigella, Salmonella y Campylobacter) y
protozoos intestinales (Giardia lamblia, Entamoeba
histolytica, Cryptosporidium spp. y microsporidios).
La adecuada toma y transporte de las muestras es un factor clave en el rendimiento
de las técnicas microbiológicas.
Los microorganismos implicados en las ITS suelen ser de crecimiento fastidioso, por lo que las técnicas que
solamente detectan microorganismos viables pueden dar resultados falsos negativos si no se siguen de forma
estricta las normas de recogida y transporte de las muestras.
Conceptos generales para el rendimiento óptimo: ➢ Cualquier toma debe realizarse antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano. ➢ Evitar el uso de antisépticos o lubricantes ya que pueden inhibir el crecimiento de algunos microorganismos. ➢ Escobillón: para cultivo siempre con medio, para biología molecular siempre seco.
- En varón: primer chorro de la primera orina de la mañana.
Para estudio de VIH, VHC, VHA, Sífilis se remitirá muestra de suero
seimc-procedimiento24a.pdf
Diagnóstico microbiológico: pruebas rápidas Contribuyen al control de las ITS : ✓ Facilitan un tratamiento etiológico rápido y específico. ✓ La demora en el diagnóstico condiciona tratamientos mal dirigidos o ausentes. ✓ Los resultados inmediatos evitan nuevos contagios al interrumpir la cadena de transmisión.
Diagnóstico microbiológico: pruebas rápidas
seimc-procedimiento24a.pdfNeisseria gonorrhoeae a) Examen microscópico (escobillón seco): tinción de Gram. La observación a x1000 aumentos de ≥ 2 PMN por campo y diplococos gramnegativos, permite hacer un diagnóstico rápido de uretritis gonocócica con una buena sensibilidad (>95%) y especificidad (III, C). La sensibilidad de la tinción de Gram en varones asintomáticos, en exudados endocervicales y en exudados rectales y faríngeos es baja, por lo que no es una herramienta útil para descartar estas infecciones.
Neisseria gonorrhoeae b) Cultivo : es muy sensible a las condiciones ambientales, transportar inmediatamente (≤ 1h) al laboratorio (4ºC). • Única prueba diagnóstica que permite realizar estudios de sensibilidad antimicrobiana→ detectar y monitorizar las resistencias antimicrobianas. • El cultivo es adecuado para muestras: ➢Endocervicales ➢Uretrales ➢Rectales ➢Faríngeos ➢Conjuntivales Se precisa escobillón con medio, en varón utilizar escobillón fino de alambre.
c) TAAN. (escobillón seco) Actualmente son las recomendadas Ventajas: ▪ Detectan microorganismos no viables facilitando la recogida, transporte y procesamiento de las muestras (2d a 4ºC) ▪ Alta sensibilidad y especificidad para muestras genitales ( 98-100%) ▪ Rapidez Desventajas: ▪ No permiten estudio de sensibilidad ▪ En muestras extragenitales, la especificidad de estas pruebas es inferior, pudiendo dar falsos positivos.
Micoplasmas genitales
Diagnóstico:
a) CULTIVO
Ventajas:
• Cuantificación: elevada prevalencia en la colonización del tracto genital de las personas sanas por
lo que se precisa de una cuantificación para valorar si se asocia o no a enfermedad.
➢ Los recuentos iguales o superiores a 104 Ufc/ml de Ureaplasma spp en la uretra masculina se
consideran significativos.
➢ Los recuentos de Ureaplasma spp de 105 Ufc/ml en vagina se asocian con parto pretérmino y
endometritis
➢ Los recuentos elevados de M. hominis de 105 Ufc/ml o superiores en la vagina, suelen
asociarse a vaginosis bacteriana, EPI y endometritis.
• Permite estudio de sensibilidad
Inconvenientes:
• Son muy sensibles a las condiciones ambientales (falsos negativos)
• No diferencian entre U. parvum y U. urealyticum ni identifica M. genitaliumMicoplasmas genitales b) TAAN: Ventajas: • Se ha podido establecer el papel etiológico de M. genitalium, organismo muy difícil de cultivar, y que es responsable tanto de casos de cervicitis, endometritis y EPI como de uretritis → segunda causa de uretritis no gonocócica en el varón. • Permiten diferenciar entre U. parvum y U. urealyticum. • Rápidas Inconvenientes: • Presencia / ausencia: M. hominis y Ureaplasma spp. • No pruebas de sensibilidad antibiótica.
Micoplasmas genitales Muestras: ✓ Orina masculina (primera evacuación) ✓ Semen ✓ Muestra uretral, endocervical (escobillón seco para TAAN y con medio para cultivo). ✓ Se deben transportar inmediatamente al laboratorio.
Chlamydia trachomatis TAAN: técnica de elección Tipo de muestra • En varón: primera parte de orina en bote estéril de boca ancha (20 mL, al menos 1h después de la última micción)/ muestra uretral (escobillón fino de alambre seco). • Vaginal / endocervical en la mujer (escobillón seco). Aunque estas técnicas moleculares aún no están validadas para determinar la presencia de C. trachomatis en muestras extragenitales como faringe y recto, son ampliamente utilizadas en estas muestras. Las muestras se conservarán refrigeradas.
Vaginosis bacteriana Alteración de la microbiota saprofita normal de la vagina con una disminución de Lactobacillus spp. y un sobrecrecimiento poblacional de Gardnerella vaginalis y otras bacterias aerobias y anaerobias. Diagnóstico: • Se establece fundamentalmente por los signos clínicos y las características del flujo vaginal (grisáceo, líquido y con olor a pescado). • Microbiológico: ➢Tinción de Gram: escobillón seco (4ºC). S: 62 -100% E: 79-100%. Se observan células CLUE ➢Cultivo: escobillón con medio (4ºC) ➢Técnicas rápidas (Affirm VP III, Becton-Dickinson) Detectan la presencia de Candida spp., GV y TV en muestras vaginales con una S:99%, E:90% en 1h.
Candidiasis vaginal
En la mujer es la segunda causa más común de vaginitis en mujeres en edad fértil.
En el hombre, la balanitis y la balanopostitis pueden adquirirse a través del contacto sexual directo
con parejas que presentan candidiasis vulvovaginal y por tanto tienen consideración de ITS
Diagnóstico:
➢ Sindrómico (prurito vulvar y la sensación de ardor, flujo blanquecino )
➢ Microbiológico:
- Tinción de Gram: escobillón seco (4ºC). S: 62 -70%.
- Cultivo (escobillón con medio (4ºC)): medios cromogénicos.
- Técnicas rápidas (Affirm VP III, Becton-Dickinson): Detectan la
presencia de Candida spp., GV y TV en muestras vaginales con una S:99%,E:90% en 1h.T. vaginalis
• Diagnóstico microbiológico:
a) Microscopía: examen en fresco a partir de muestra directa. S (45-68%), E 98%. La T< 22ºC y el
retraso en la observación de 10-30 minutos disminuye la sensibilidad drásticamente.
b) Cultivo: medios Roiron y Diamond. Resultados entre 3 y 7d. S (44-75%) en mujeres y del 40-
56% en hombres.
c) Pruebas rápidas (Affirm VP III, Becton-Dickinson). Detectan la presencia de Candida spp., GV y
TV en muestras vaginales con una sensibilidad y especificidad para TV del 83% y 100% en 1h.
d) TAAN: técnica de elección. Sensibilidad del 90,1% y una especificidad del 100%
Muestras:
• Varón: orina+ exudado uretral en escobillón con medio
• Mujer: escobillón vaginal con medio.Papilomavirus humanos (VPH) • Diagnóstico microbiológico: TAAN: técnica de elección
Papilomavirus humanos (VPH) Recogida de la muestra: • Cepillado endocervical: se introduce en las dos terceras partes del canal endocervical y se rota suavemente entre 90 y 180 grados o 5 veces en el sentido de las agujas del reloj. Se evitarán tomas de muestra con sangre (se inhibe la PCR) • Varón: triple toma en glande, surco coronario y uretra distal (introduciendo los tres cepillos en un mismo vial). • El cepillado anal, tanto en mujeres como en hombres, se realizará de varias zonas tomadas al azar.
Papilomavirus humanos (VPH) b) Transporte y conservación de la muestra: Previamente a la toma de la muestra, los viales de citología líquida se mantendrán a temperatura ambiente. El transporte de las muestras debe realizarse lo antes posible al laboratorio de Microbiología a temperatura ambiente.
Sífilis (Treponema pallidum) Diagnóstico microbiólogico: • Directo (detección de T. pallidum en las lesiones, adenopatías, tejidos o LCR) • Indirecto (detección de anticuerpos): ➢ RPR (pruebas no treponémicas o reagínicas) ➢ Ac. anti T.pallidum (TPHA, quimioluminiscencia, inmunoblot….)
Sífilis (Treponema pallidum) a) Diagnóstico directo ➢ Microscopía de campo oscuro de las muestras de úlceras o de lesiones exudativas cutáneas: diagnóstico inmediato mediante la visualización de los treponemas móviles. Inconvenientes: la observación ha de ser inmediata a la recogida (
Sífilis (Treponema pallidum) b) Diagnóstico indirecto (serología) ➢ Pruebas no treponémicas/ reagínicas (RPR y VDRL): • Detectan anticuerpos (IgG + IgM) frente a una combinación de cardiolipina, lecitina y colesterol. No son anticuerpos específicos pero son un indicador muy útil de la actividad de la enfermedad. • Técnicas cuantitativas: ayudan a establecer la fase de la enfermedad. En general, títulos >1/16 indican enfermedad activa (tratamiento en función de la clínica..). • Seguimiento de la respuesta al tratamiento: la caída del título después del tratamiento es variable. En el caso de una sífilis primaria o secundaria, se recomienda realizar una evaluación serológica a los 3, 6 y 12 meses. El título debería de caer 4 veces (dos diluciones) en 6 meses. • En el caso de una sífilis tardía, o después de múltiples episodios de infección, la caída del título es más lenta y puede estabilizarse a títulos bajos. • En el caso de una sífilis latente, puede no producirse la respuesta serológica no treponémica
Sífilis (Treponema pallidum) b) Diagnóstico indirecto (serología) ➢ Pruebas treponémicas (TPHA, FTA, Inmunoblot, EIA y quimioluminiscencia (CLIA): Ac IgM+ IgG) - Detectan anticuerpos específicos frente a T. pallidum. - Permanecen positivas de por vida incluso en infecciones tratadas: no deben emplearse como marcadores de actividad ni para la valoración del éxito del tratamiento.
Sífilis (Treponema pallidum)
seimc-procedimiento24a.pdfSífilis (Treponema pallidum)
Ac. Anti T.pallidum (IgG + IgM)
(CLIA)
Positivo Negativo
RPR No se detectan anticuerpos frente a
T. pallidum
Positivo Negativo
Se informa TPHA
titulación Negativo
Positivo
Se realiza inmunoblot
Positivo Negativo
Se confirma contacto con
T. pallidum No se confirma infección
Se confirma contacto con
por T. pallidum (falso
T. pallidum
positivo??)Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)
• Diagnóstico microbiológico: SEROLOGÍA
➢Test de 3º generación: detectan anticuerpos.
➢Test de 4º generación: Ac + Ag-p24 (acorta el período ventana a 13-
15 días): (CLIA)
➢Western blot confirmatorio
Un resultado negativo requiere seguimiento hasta los 3 meses tras la
primera prueba negativa.Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH): algoritmo diagnóstico
Detección de Ac anti VIH 1 y 2 y Ag-p24
(CLIA)
NEGATIVO
POSITIVO
Positivo. Remitan nueva muestra para
confirmar y tubo de carga viral.
No se detecta
Nueva muestra
POSITIVO
NEGATIVO
Western Blot
POSITIVO
NEGATIVO
No se detecta
POSITIVO
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