"TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE RABIA" - Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA)
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“TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA
EL DIAGNÓSTICO DE RABIA”
Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA)
LABORATORIO DE REFERENCIA DE LA OIE PARA RABIA
MVZ EPA. ISRAEL NICOLÁS REYES
AGOSTO 18, 2021
1
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
2
Contenido
3
Importancia
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
4
Importancia
Indicaciones y recomendaciones para evitar accidentes
5
DEFINICIONES
• Seguridad(ISO 45001)
• Accidente de trabajo
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
6
¿POR QUÉ PODRÍA SUCEDER UN ACCIDENTE?
a) Condiciones Inseguras:(4%)
b) Actos Inseguros: (96%)
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
7
DEFINICIONES
Peligro: Fuente o situación potencial de daño , lesión o daño.
Riesgo: lesión o enfermedad
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
8
BIOSEGURIDAD
Es un conjunto de normas y medidas para proteger la salud
del personal, frente a riesgos biológicos, químicos y físicos
a los que está expuesto en el desempeño de sus funciones,
también a los pacientes y al medio ambiente. (OMS 2005)
Fuente: El desarrollo del símbolo de riesgo biológico.
https://seguridadbiologica.blogspot.com/2010/07/el-desarrollo-del-simbolo-de-
riesgo.html
9
PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
1. Universalidad
2. Barreras de protección
3. Medidas de eliminación
Fuente: "Medidas de Bioseguridad“. jueves, 8 de septiembre de 2016.
http://medidasdebioseguridadgraco.blogspot.com/2016/09/medidas-de-
bioseguridad.html.
10PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
1.- UNIVERSALIDAD
Todo el personal debe seguir las precauciones
estándares
• Capacitación
• Instructivos
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
11PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
2.- USO DE BARRERAS PROTECTORAS
Establece el concepto de evitar
la exposición directa
minimizando los accidentes.
Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
12PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
Considerar:
que las muestras procesadas durante la rutina pueden contener
otros agentes patógenos que atacan el sistema nervioso
central.
13PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
INMUNIZACIÓN
Esquema profiláctico pre-exposición
3 semanas después de la última 0,5 UI/ml
Monitoreo de titulación de anticuerpos rábicos
14PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
EQUIPO DE PROTECCIÓN PERSONAL
• Overol
• Guantes de hule grueso
• Careta o mascarillas con protección
• Cubre bocas- mascarilla
• Cofia
• Botas de campo
• Faja
• Mandil impermeable
15PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
CONSIDERAR
• Lavarse siempre las manos
• Cubrir cortadas
• Herida lavada con agua y jabón,
Desinfección del material
utilizado
16PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD
3. MEDIDAS DE ELIMINACIÓN
Es el conjunto de dispositivos y
procedimientos a través de los cuales
se procesan y eliminan muestras
biológicas sin riesgo para los
operadores y la comunidad
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
17APERTURA DEL CRÁNEO Y TOMA DE MUESTRA
GRANDES Y MEDIANAS ESPECIES
Recolección de muestras de animales sospechosos de rabia o de
aquellos animales que muestren signos de alguna enfermedad
nerviosa.
El proceso de sacrificio no debe dañar el encéfalo (NOM-033-
SAG/ZOO-2014)
18APERTURA DEL CRÁNEO Y TOMA DE MUESTRA
Extracción y toma de muestra:
• MVZ o personal entrenado
• EPP
• Se recomienda lavar antes de iniciar la necropsia con
abundante agua y jabón
• Separar la cabeza del cuerpo del animal a nivel de la articulación
atlanto-occipital
• Ubicarla sobre una mesa o soporte.
• Sujetar firmemente la cabeza
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19APERTURA DEL CRÁNEO
INSTRUMENTOS Y MATERIAL
•Segueta o sierra de carnicero
•Cuchillo
•Tijeras para cirugía
•Pinzas
PARA EL ENVÍO DE LAS MUESTRAS PARA EL
DIAGNÓSTICO:
•Bolsas de plástico (de preferencia con cierre hermético, tipo ziploc)
•Frascos de plástico de boca ancha con cierre hermético de un volumen
de 1 y medio litros
•Refrigerantes en cantidad suficiente o Glicerina fosfatada al 50 por
ciento
•Hielera
20APERTURA DEL CRÁNEO
APÉNDICE “A” (NORMATIVO)
1. Retirar la piel del cráneo y efectuar los siguientes cortes con
segueta o sierra de carnicero para el corte de los huesos
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
21APERTURA DEL CRÁNEO
2. El primer corte es el del hueso frontal, transversal y posterior a las cuencas oculares, las cuales
sirven para sujetar la cabeza y como puntos de referencia.
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
22APERTURA DEL CRÁNEO
3. Se hacen dos cortes, uno en cada
hueso parietal, desde el agujero
occipital hasta el hueso frontal
haciendo un corte longitudinal
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
23APERTURA DEL CRÁNEO
4. Desprender la bóveda craneana para exponer el encéfalo
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
• 5. se disecan las meninges y se extrae cuidadosamente el encéfalo completo a partir
del mesencéfalo (tallo cerebral) hasta los dos hemisferios.
24APERTURA DEL CRÁNEO
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
25APERTURA DEL CRÁNEO
PRENSA MECÁNICA
Garantizar la bioseguridad,
la salud y seguridad del
personal
Disminuye el riesgo de
accidentes y
enfermedades
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
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ENVÍO DE LA MUESTRA
Normativa nacional e internacional
Normas Especiales Relativas a Mercancías Peligrosas establecidas por la Asociación Internacional del Transporte Aéreo (AITA).
Estas indicaciones se resumen en el Capítulo 1.1.1. Recolección y envío de muestras para el diagnóstico (Sistema Básico de
Triple Embalaje).
NOM-051-SCT2/2003, ESPECIFICACIONES ESPECIALES Y ADICIONALES PARA LOS ENVASES Y EMBALAJES DE LAS
SUBSTANCIAS PELIGROSAS DE LA DIVISIÓN 6.2 AGENTES INFECCIOSOS
28ENVÍO DE LA MUESTRA
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
29ENVÍO DE LA MUESTRA
Diúrex Cráneo
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
30ENVÍO DE LA MUESTRA
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
31ENVÍO DE LA MUESTRA
Principios de la bioseguridad
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
32ENVÍO DE LA MUESTRA
33ENVÍO DE LA MUESTRA
Envío menor de 24 hrs: refrigeración.
Mayor a 24 hrs: congelación.
Glicerol al 50% en PBS
Coordinar envíos.
34ACEPTACIÓN Y RECHAZO
Muestras para aceptación:
Bovino: encéfalo, médula espinal y cerebelo.
Perro: encéfalo, médula espinal y cerebelo (cabeza del animal).
Quirópteros: se debe enviar el espécimen completo congelado.
Roedores: se debe enviar el espécimen completo congelado
Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
35ENVÍO DE LA MUESTRA
Criterios de rechazo:
Muestras inadecuadas (diferentes a las establecidas).
Muestra insuficiente.
Muestras en estado de descomposición con avanzados cambios
autolíticos.
Muestras no identificadas.
Muestras en formaldehído, fenol o alcohol.
3637
CENASA-LABORATORIO DE REFERENCIA DE OIE PARA RABIA
Dirección: Rogelio Estrada Rodriguez
rogelio.estrada@senasica.gob.mx
3839
“DIAGNÓSTICO DE RABIA”
Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA)
Laboratorio de Referencia de la OIE para rabia
MVZ EPA ISRAEL NICOLÁS REYES
Agosto, 2021
40Índice
Introducción Pruebas
diagnósticas Conclusiones
41Introducción
Laboratorio certificado en NMX 17025, ISO 9001, ISO 14001,ISO 45001 e ISO 17043
Fotos: Rogelio Barrios
42Laboratorio de Referencia de OIE para la rabia
Alemania, Canadá, China, Corea, USA, Francia, Reino Unido, Sudáfrica, Rumania, India,
Israel y México.
Mayo de 2014
https://www.oie.int/es/que-ofrecemos/red-de-expertos/laboratorios-de-referencia/
43Laboratorio de Referencia
Utilizar, promover y difundir los métodos de diagnóstico validados
Utilizar, desarrollar Material de Referencia de acuerdo a las prescripciones de la OIE
Distribuir a los laboratorios nacionales los productos biológicos
44Laboratorio de Referencia
Organizar ensayos “inter-
laboratorios” con el fin de
asegurar la equivalencia de
los resultados
(ISO/IEC17043)
45Ensayos de Aptitud (AP)
Evaluar Estandarizar y armonizar Emisión de resultados
Objetivo:
Identificar diferencias Identificar problemáticas y acciones
46Red de Laboratorios
SON
CHIH
Foto: CENASA
DUR
ZAC
QRO YUC
CDMX
CAMP
CENASA TAB
CHI
Foto: CENASA, BSL-2
47Diagnóstico
48Pruebas de laboratorio para el diagnóstico de
rabia
Área de rabia del Centro Nacional de Servicios
de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).
- Manual de Sistema de Gestión Integral CNSADIM02.
- Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los
Animales Terrestres . OIE Manual of Diagnostics Tests and
Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds, and bees). 8th
edition, 2018 Capt. 3.1.17
- Eliminación de residuos (CNSATVP07).
49Métodos Diagnósticos
Demostración de un Detección de ácido nucleico
RT-PCR convencional
componente viral: Caracterización: PCR Tiempo Real
Inmunofluorescencia (IF) Secuenciación
Aislamiento del
Foto: CENASA, BSL-2
virus
Detección de
AVCC
anticuerpos
Prueba Biológica Constatación (FAVN)
50Lineamientos
Exposición con personas:
Positivo Secuenciación
IFD Procesamiento y emisión de resultado Inmediato
Negativo PCR
AV
51Caracterización
?
SECUENCIAS DE
REFERENCIA
CPA
CENASA
LASD
SECUENCIACIÓN
ANÁLISIS Troupin et al., 2016
Venegas-Cureño et al., 2018
FILOGÉNICO
52IF
1958 Goldwasser and Kissling
+, ++, +++, ++++
https://www.cdc.gov/rabies/diagnosis/direct_fluorescent_antibody.html
53Técnica de oro
+ -
54Inmunofluorescencia directa
1. Corte o impronta 3. Anticuerpo
conjugado con FITC 5. OBSERVACIÓN
(Ag desconocido)
(reactivo)
Microscopio
fondo oscuro-Luz
UV
Incubación
2. Fijado con acetona
4. Lavado
55VENTAJAS DESVENTAJAS
• Rápida, sencilla • Costo equipo
• Especificidad y sensibilidad del • Lectura subjetiva
96% al 99%
56AISLAMIENTO VIRAL (INOCULACIÓN EN RATÓN)
• Ratones 3-4 semanas
• Inóculo: sobrenadante clarificado homogenado de
material cerebral al 20%
• Antibióticos
• Observación 28 días
57Aislamiento viral (prueba biológica)
El inóculo es el sobrenadante clarificado de un homogenado
de material cerebral al 20%
1. Corte o impronta 3. Anticuerpo
conjugado con FITC 5. OBSERVACIÓN
(Ag desconocido)
(reactivo)
Microscopio
fondo oscuro-Luz
UV
Incubación
2. Fijado con acetona
4. Lavado Controles
58RT- PCR
59Histopatología
• Cuerpos de Negri.
• Para las pruebas inmunohistoquímicas en muestras de encéfalo fresco o en cortes de tejido fijado en formalina
también puede utilizarse conjugado de peroxidasa.
60Diagnóstico serológico
Puede utilizarse para:
• Determinar si existen o no anticuerpos como correlación de la presencia del virus
• Anticuerpos maternos
• Evaluación de campaña de vacunación
• Monitorear la eficacia de la vacunación (Comercio internacional)
• Seroperfil: edad y etapa reproductiva
61Métodos serológicos
SERONEUTRALIZACIÓN
62Método
FAVN
• Examen de laboratorio para detectar y medir la
cantidad de anticuerpos en el suero.
• Sueros Patrón.
• Utiliza cultivos celulares (células BHK21).
• Cuando hay anticuerpos en el suero, previenen la
infección de los cultivos por el virus rábico (CVS).
63Método
FAVN
• La lectura de las placas se realiza con el uso de un conjugado monoclonal marcados con un fluoróforo,
el cual se adhiere a las células infectadas con el virus de la rabia.
• En la lectura se cuentan los pozos infectados, y se hace el cálculo del título de anticuerpos, el cual se
expresa en UI/ml.
64Resultados
Si la mascota tiene un resultado satisfactorio (≥0,5 UI/ml) :
• Tiene un determinado tiempo para entrar al país de destino o revacunación en algunos
casos.
Si la mascota tiene un resultado no satisfactorio (Criterios
https://sistemasssl.senasica.gob.mx/sinacertweb/pages/publico/consultaRequisitosExportacion.xhtml (GOB.MX - SENASICA.html)
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CENASA-LABORATORIO DE REFERENCIA PARA RABIA
Contactos:
Dirección: Rogelio Estrada Rodriguez
rogelio.estrada@senasica.gob.mx
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