VENTAJAS DE LA METODOLOGÍA HPLC EN LA DETERMINACIÓN DE HBA1C Y SU USO PARA EL DIAGNÓSTICO - XLIII CONGRESO MEXICANO DE PATOLOGÍA CLÍNICA MÉRIDA ...
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XLIII
Congreso
Mexicano
de
Patología
Clínica
2013
Mérida,
Ventajas de la metodología HPLC en la
determinación de HbA1c y su uso para el
diagnóstico
Dra.
Maria
del
Carmen
Candia
Plata
DIABETES
MELLITUS
9.2%
de
la
población
adulta
con
diagnósEco
previo
de
diabetes.
ENSANUT,
2012
(
hTp://www.
innsz.mx)
Al
tener
diabetes,
la
expectaEva
de
vida
se
reduce
7
años
(Murea
y
col,
2013).
Primera
causa
de
muerte
en
adultos
Sánchez-‐Barriga,
2010
Tasa 53.2/100,000
Villalpando
y
col,
2010
Control
metabólico
Revaloración
periódica
para
el
diagnósEco
oportuno
20
años
10
años
0
10
años
20
Momento
en
que
se
establece
el
diagnósEco
de
diabetes.
Complicaciones
en
el
30-‐50%
de
los
pacientes.
Posible
inicio
del
proceso
La hiperglicemia es el principal factor de riesgo secundario
Elevación
HTAS
de
Tg´s
Hiper-‐
Hipo-‐
betas
alfas
Hiper-‐
HiperHcys
glicemia
Complicaciones
Abdo-‐
obesidad
Insulino-‐
Estrés
resistencia
oxidaMvo
Glicemia
mg/dL
MarPn-‐Frías
et
al.
An
Pediatr
(Barc).
2009;70(2):120–125
La
medición
de
marcadores
indirectos
estables,
evita
el
sesgo
asociado
con
las
fluctuaciones
de
la
glicemia
Hemoglobina
α
2
γ2
(F=0.5%)
α2β2
(A=97%)
α2δ2
(A2=2.5%)
HbA0
HbA1
(GHb)
>
93%
<
7%
Glucosa
Hb
A1a1
y
a2
(0.5%)
HbA1b
(0.5%)
HbA1c
(4-‐6%)
Kilpatrick E.S. Glycated haemoglobin in the year 2000. J Clin Pathol. 2000;53:335-339.
Ø Diversos estudios clínicos revelaron una estrecha relación entre las complicaciones tardías de la diabetes y la concentración de HbA1 en sangre. qThe Diabetes Control and ComplicaMons Trial Research Group. The effect of intensive treatment od diabetes on the development and progression of long-‐term complicaMons in insulin-‐dependent diabetes mellitus. N Engl J Med 1993;329-‐077-‐86. qWhite NH, Sun W, Cleary PA, Danis RP, Davis MD, Hainsworth DP, et al. Prolonged effect of intensive therapy on the risk of reMnopathy complicaMons in paMents with type 1 diabetes mellitus: 10 years aier The Diabetes Control and ComplicaMons Trial. Arch Ophthalmol 2008;126:1707-‐15. qU.K. ProspecMve Diabetes Study (UKPDS) Group. Intensive blood-‐glucose control with sulphonylureas or insulin compared with convenMonal treatment and risk of complicaMons in paMents with type 2 diabetes (UKPDS 33). UK ProspecMve Diabetes Study (UKPDS) Group. Lancet 1998;352:837-‐53 qStralon IM, Adler AI, Neil HA, et al. AssociaMon of glycaemia with macrovascular and microvascular complicaMons of type 2 diabetes (UKPDS 35): prospecMve observaMonal study. BMJ 2000; 321: 405-‐412. qThe ADVANCE CollaboraMve Group. Intensive blood glucose control and vascular outcomes in paMents with type 2 diabetes. N Engl J Med 2008;358: 2560-‐2572. qOhkubo Y, Kishikawa H, Araki E, et al. Intensive insulin therapy prevents the progression of diabeMc microvascular complicaMons in Japanese paMents with non-‐insulin-‐dependent diabetes mellitus: a randomized prospecMve 6-‐year study. Diabetes Res Clin Pract 1995; 28: 103-‐117. qIsmail-‐Beigi F, Craven T, Banerji MA, et al, the ACCORD trial group. Effect of intensive treatment of hyperglycaemia on microvascular outcomes in type 2 diabetes: an analysis of the ACCORD randomised trial. Lancet 2010; 376: 419-‐430.
A partir de entonces empezó a usarse la HbA1c para estimar el estatus metabólico y monitorear el efecto del tratamiento de los pacientes con diabetes. Ø Buen estimador de la glicemia crónica porque la glicación se produce a lo largo de la vida eritrocitaria. Ø Baja variabilidad biológica intraindividual (
La estandarización inició con programas nacionales en
1996
1.
NaEonal
Glycohemoglobin
StardardizaEon
Program
(NGSP):
Sistema
HPLC
Bio-‐Rex
70
como
el
método
estándar
de
referencia
y
un
calibrador
hemolisado
liofilizado
preparado
por
el
Laboratorio
de
Referencia
Central
Primario
(St.
Louis
MO).
El
NGSP
como
responsable
de
la
calibración
y
cerEficación
de
métodos
para
HbA1c
en
EUA
y
muchas
otras
partes
del
mundo.
2.
Mono
S
Ion
Exchange
Chromatography,
como
el
método
de
referencia
Sueco.
3.
Producción
de
calibradores
de
uso
común,
con
valores
asignados
por
la
Sociedad
de
Diabetes
Japonesa
(HPLC
Yosoh;
Kyoto
Daiichi
y
luego
con
el
KO500):
Reducción
del
CV
interlab.
de
12
a
5%.
Aislamiento
de
HbA1c
y
HbA0
Material
de
referencia
cerMficado
primario
(mezcla
de
porciones
bien
definidas
de
HbA1c
y
HbA0)
Calibración
del
Sistema
de
Medición
de
Referencia
Primario
(PRMS)
Asignación
de
valores
del
PMRS
a
Materiales
de
Referencia
Secundarios
(SRMs;
sangre
total)
Uso
de
los
SRMs
por
los
fabricantes,
para
calibrar
sus
instrumentos
y
métodos.
Weykamp
C,
John
WC,
Mosca
A,
Hoshimo
T,
LiTle
R,
Jeppsson
JO,
et
al.
The
IFCC
reference
measurement
system
for
HbA1c:
a
6-‐year
progress
report.
Clin
Chem.
2008;54:240-‐8
Método
de
Referencia
IFCC
(de
orden
superior)
HbA0 y
HbA1c
Endoproteinasa
Glu-‐C
Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu
Gluc-Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu
HPLC-‐MS
o
HPLC-‐EC
Hp
glicado
En
%
(unidad
IFCC)
Hp
no
glicado
Europa,
Australia
y
Japón
calibran
sus
sistemas
analíEcos
de
acuerdo
con
este
procedimiento
y
reportan
en
mmol/mol.
Los
laboratorios
de
USA
permanecieron
con
la
calibración
NGSP
y
expresan
sus
valores
en
%.
üLa
comparación
de
los
resultados
de
HbA1c
generados
por
la
red
de
laboratorios
del
IFCC,
con
los
de
cada
una
de
las
redes
de
EUA,
Japón
y
Suecia,
designadas
como
métodos
de
comparación
(DCMs),
mostró
que
la
relación
entre
cada
DCM
y
el
método
IFCC
es
linear.
üEn
el
2007,
IFCC,
IDF,
ADA
y
EASD,
recomendaron
el
uso
de
unidades
del
SI
FCCC.
Para
su
implementación
progresiva
recomendaron
el
uso
de
ecuaciones
maestras
que
relacionan
las
unidades
IFCC
con
las
restantes.
Hanas
R,
Garry
J,
on
behalf
of
the
InternaMonal
HbA1c
Consensus
Commilee.
2010
Consensus
Statement
on
the
Worldwide
StandardizaEon
of
the
Hemoglobin
A1c
Measurement:
the
American
Diabetes
AssociaMon,
European
AssociaMon
for
the
Study
of
Diabetes,
InternaMonal
FederaMon
of
Clinical
Chemistry
and
Laboratory
Medicine,
and
the
InternaMonal
Diabetes
FederaMon.
Clin
Chem
Lab
Med
.
2010;48(6):775–776.
Relación
entre
valores
IFCC
y
NGSP:
NGSP-‐HbA1c
=
0.9148
(IFCC
HbA1c)
+
2.152%
Hoezel
et
al,
Clin
Chem.
2004;50:166-‐74
Relación
entre
valores
IFCC
y
JDS/JSCC:
JDS/JSCC
HbA1c
=
0.927
(IFCC
HbA1c)
+
1.73%
Relación
entre
valores
IFCC
y
Swedish
HbA1c:
Swedish
HbA1c
=
0.989
(IFCC
HbA1c)
+
0.88%
Hoezel
et
al,
Clin
Chem.
2004;50:166-‐74
El
valor
analíEco
del
sistema
de
referencia
IFCC,
mejoró
recientemente
usando,
como
estándares
internos,
hexapépEdos
de
mayor
pureza
y
deuterados
Así,
hay
tres
valores
blanco
posibles:
1. Valor
de
concenso.
2. Valor
de
referencia
IFCC.
3. Valor
de
referencia
IFCC
LC-‐ID-‐MS
(el
mayor
grado
de
exacEtud).
En
el
2013,
es
posible
elegir
métodos
cerEficados
por
NGSP
y
trazables
al
sistema
de
referencia
IFCC
LC-‐ID-‐MS,
para
alcanzar
tres
objeEvos:
1.
Control
Glicémico
de
los
pacientes;
Meta:
HbA1c
<
7
%
<
7.5%
en
caso
de
comorbilidades
o
si
el
riesgo
de
hipoglicemia
es
grande,
especialmente
en
adultos
mayores;
<
8.5%
en
niños
con
DM1
qAmerican
Diabetes
AssociaMon.
Standards
of
medical
care
in
diabetes.
Diabetes
Care
2010;
33:S11-‐S61.
qAmerican
Diabetes
AssociaMon.
Standards
of
medical
care
in
diabetes.
Diabetes
Care
2013;
36:S11-‐S66.
qAsociación
LaMnoamericana
de
Diabetes.
Guías
ALAD
de
diagnósMco,
control
y
tratamiento
de
la
diabetes
mellitus
Mpo
2,
2010.
hlp://www.alad-‐laMnoamerica.org/
(acceso
en
octubre,
2013).
qInternaMonal
Diabetes
FederaMon,
2012.
Clinica
guidelines
task
force.
Global
guideline
for
type
2
diabetes.
hlp://www.idf.org/sites/default/files/IDF-‐Guideline-‐for-‐Type-‐2-‐Diabetes.pdf
)(accesed,
october
2013).
Valores
meta
de
HbA1c
cuando
la
esEmación
se
realiza
con
métodos
trazables
al
sistema
de
referencia
IFCC
IFCC
NGSP
Intervalo
de
Ref
(no
diabéEcos)
20-‐42
mmol/mol
4-‐6%
Meta
general
de
control
en
diabetes
Ø Con la HbA1c se puede calcular la glicemia
promedio (resultados más comprensibles para el
paciente)
Cowie et al, Diabetes Care. 2010;33:562–568.
Littleet al, J Diabetes Sci Technol. 20009;3(3):446–451.
Fue
una
aplicación
que
generó
controversia
hasta
el
2008:
Porque las mediciones de glucosa no se habían hecho tan
frecuentemente como para obtener un verdadero promedio y
muchos de los métodos con los que se habían realizado los
estudios de correlación, no habían sido armonizados sobre
métodos de referencia.
The
proposed
terminology
‘A1c-‐derived
average
glucose’
is
inherently
imprecise
and
should
not
be
adopted.
Diabetologia.
2008;51:1111-‐4.
Consensus
statement
on
the
worldwide
standardisaMon
of
the
HbA1c
measurement.
Diabetologia.
2007;
50:2042–2043).Expresión de la HbA1c como el promedio de la
concentración de glucosa
Glucosa
plasmáEca
promedio
(mg/dL)
A1C
(%)
ADA,
2011*
ALAD,
2010
6
126
135
7
154
170
8
183
205
9
212
240
10
240
275
11
269
310
12
298
345
*
en
507
adultos
(83%
Caucásicos).
ADA,
Asociación
de
Diabetes
Americana
ALAD,
Asociación
LaEnoamericana
de
Diabetes
Traducción
de
los
valores
de
HbA1c
a
valores
de
glucosa
plasmáEca
promedio
(eAG)
usando
la
ecuación
eAG
(mg/dL)
=
(28.7
HbA1c)
-‐46.7;
r2
=
0.84
A1C
(%)
eAG
(mg/dL)
eAG
(mmol/L)
5
97
5.4
6
126
7.3
7
154
8.6
8
183
10.2
9
212
11.8
10
240
13.4
11
269
14.9
12
298
16.5
Diabetes
Care
2008;31:1-‐6
hlp://www.ngsp.org
3.
Uso
de
la
HbA1c
para
el
diagnósEco
de
la
diabetes
Aplicación restringida al caso en el que se use un método
certificado.
qPunto
de
corte
para
el
diagnósEco
de
diabetes:
HbA1c
>
6.5
InternaMonal
Expert
Commilee.
InternaMonal
Expert
Commilee
report
on
the
role
of
the
A1C
assay
in
the
diagnosis
of
diabetes.
Diabetes
Care
2009;
32:
1327–1334.
American
Diabetes
AssociaMon.
Standards
of
medical
care
in
diabetes.
Diabetes
Care
2010;
33:S11-‐S61.
InternaMonal
Diabetes
FederaMon,
2012.
Clinica
guidelines
task
force.
Global
guideline
for
type
2
diabetes.
hlp://www.idf.org/sites/default/files/IDF-‐Guideline-‐for-‐Type-‐2-‐Diabetes.pdf
(Accesed,
October
2013):
HbA1c
<
6.0%
es
normal.
q Medición
de
la
glicemia
y
HbA1c
en
una
sola
muestra
sanguínea
(ambos
deben
mostrar
valores
diagnósEcos)
(Seino
et
al.
J
Diabetes
Invest.
2010;1:212-‐228).
Para
medir
HbA1c,
se
usan
diferentes
métodos
1. Inmunoensayos.
2. Ensayos
basados
en
los
cambios
de
pI.
3. Ensayos
basados
en
la
afinidad
de
la
hemoglobina
glicada
por
boronato.
4. Ensayos
enzimáEcos.
ObjeEvo:
Elegir
un
método
que
permita
comparar
los
resultados
con
los
de
otros
métodos
y
otros
laboratorios,
en
cualquier
país.
ØEn
México,
muchos
laboratorios
todavía
uElizan
métodos
no
cerEficados.
En
el
2007,
la
situación
era
similar
a
la
de
Estados
Unidos
antes
de
1996:
La imprecisión analítica CV = 26.4 - 32.7%
(Rojano et al, Bioquimia. 2007; 32(3):91-99).
ØEsto
ha
impedido
la
definición
de
metas
clínicas
nacionales.
Ø Desde
el
2006,
Qualitat
ha
trabajado
en
favor
de
la
calidad
analíEca
de
los
procedimientos
de
laboratorio
y
actualmente
colabora
en
la
mejora
conEnua
del
trabajo
de
laboratorio
clínico
conforme
a
la
Guía
La6noamericana
para
la
Mejoría
de
Calidad,
Bioé6ca
y
Relevancia
Médica.
www.qualitat.cc
Debe tenerse en mente que los programas certifican métodos, pero no
evalúa los métodos por sus interferentes, por lo que debe estudiarse el
efecto de las variantes de interés en el método que haya sido elegido.
ØDeben tenerse en mente todos los posibles interferentes,
porque el cambio en la concentración de HbA1c en 1% refleja
un cambio de 1.4 a 1.9 mmol/L en la concentración de glucosa
sanguínea promedio. En consecuencia, un valor de HbA1c
falsamente alto o bajo, causado por un interferente, puede
cambiar el manejo del paciente.
Nasir et al, Int J Diabet Dev C Tries. 2010;30(2): 86-90.
ØLos métodos para estimar la Hba1c, que pueden detectar
interferentes brindan certidumbre.Sobrevida eritrocitaria anormal.
Anemias hemolíticas disminuyen la HbA1c.
Policitemia la aumenta.
Las variantes de hemoglobinas interfieren con la
determinación de HbA1c
La prevalencia de hemoglobinopatías en México está
virtualmente ausente en población nativa, pero es mayor en las
costas Mexicanas (6% de HbS en condición heterocigota).
Ruiz-‐Reyes
G.
Rev
Inv
Clin.
1998:50(2):163-‐170.
El efecto sobre la determinación de HbA1c depende de
la variante de Hb presente en la muestra y del método
elegido. Little et al, Clin Chem. 2011;57(2):205-214.Inmunoensayos
AnEcuerpos
específicos
para
el
extremo
amino
terminal
de
la
globina
beta
(10,
8,
6
ó
4
úlEmos
aminoácidos
de
la
cadena),
inmovilizados
en
un
material
inerte.
Weikamp
et
al.,
J
Diabetes
Sci
Technol.
2009;3(3):439-‐445.
El
entrecruzamiento
produce
cambios
en
la
turbidez
de
la
suspensión,
que
es
proporcional
a
la
canEdad
de
anygeno
en
la
muestra.
Látex
Inmunoensayos Sitio elegido para la producción de anticuerpos. Si una Hb variante no cuenta con este segmento, se altera el reconocimiento
Inmunoensayos
Variantes de hemoglobinas con N-ter afectado.
HbS (β6 Val Glu).
HbC (β6 Lys Glu).
Hb Graz (β2 His Leu).
HbF (Cadenas γ con Gli N-ter que se glican a una tasa
menor).
Hb Raleigh (Ala N-ter en cadena β, con tendencia a la
acetilación y tasa de glicación reducida).
Little et al, Clin Chem. 2011;57(2):205-214.Inmunoensayos
El
diseño
de
estos
ensayos
es
variable,
desde
la
inmunoturbidimetría
hasta
la
inmunoturbidimetria
compeEEva
incrementada
por
látex
y
detección
enzimáEca.
Hay
gran
variedad
de
ensayos
aplicables
a
analizadores
(98
cerMficados
por
NGSP
en
el
2013).
Pueden
adaptarse
fácilmente
al
laboratorio
clínico,
pero
son
altamente
inestables
y
por
lo
tanto
caros.
La
estabilidad
limitada
de
los
reacEvos
provoca
variación
de
los
resultados
entre
pruebas.
Weikamp
et
al.,
J
Diabetes
Sci
Technol.
2009;3(3):439-‐445.
Inmunoensayos
Otras
desventajas:
Ø Curvas
de
calibración
no
lineares
(se
requiere
calibración
mulEnivel:
4
a
6
calibradores
a
parEr
de
0.0%).
Ø La
Hb
total
se
mide
de
forma
independiente,
por
un
principio
analíEco
disEnto
que
introduce
incerEdumbre
adicional
al
resultado.
Hb
total
HbA1c
Cálculo
de
la
Relación
%HbA1c
Ø El
mayor
reto
es
alcanzar
la
precisión
del
HPLC
requerido
(Inmunoensayos
Imprecisión
analíEca
total
Roche
INTEGRA
700
2.56
Roche
INTEGRA
400
2.29
Dade
DIMENSION
RxL
2.25
Trant
et
al.,
J
Diabetes
Sci
Technol.
2009;3(3):424-‐428.
Ensayos
EnzimáEcos.
Las
muestras
Liberación
de
Val
N-‐ El
H2O2
producido
en
sanguíneas
son
ter,
que
sirve
como
la
reacción,
es
medido
someEdas
a
sustrato
de
la
en
una
reacción
digesEón
fructosil
valina
enzimáEca
acoplada.
proteolíEca.
oxidasa.
El
cambio
de
absorbancia
está
relacionado
con
el
porcentaje
de
HbA1c.
Reto:
La
comparabilidad
(5
cerEficados
en
el
2011
y
20
en
el
2013).
Weikamp
et
al.,
J
Diabetes
Sci
Technol.
2009;3(3):439-‐445.
Boronato.
11
para
analizadores,
cerMficados
al
2013
(Bio-‐Rad
-‐in2itA1c-‐;
Roche,
Med
corp,
Abol,
etc.).
Sólo
4
HPLC-‐Boronato
(Trinity
Biotech).
No
es
específico
para
HbA1c.
Las
fracciones
glicadas
y
no
glicadas
son
cuanEficadas
a
415
nm.
Los
analizadores
no
han
alcanzado
suficiente
reproducibilidad.
El
reto
del
HPLC
es
la
robustez
del
sistema.
No
sufre
interferencias
por
las
variantes
de
Hb,
ni
por
la
hemoglobina
carbamilada.
et
al.,
Clin
Chem.
2005;51(1):264-‐265.
LiTle
IE-‐HPLC.
Alto
desempeño
Equipos
automaEzados,
robustos
y
con
alto
rendimiento.
Llenan
los
requerimientos
clínicos
( c a l i b r a d o r e s
e n
e l
r a n g o
requerido;
linearidad
4-‐19%).
L l e n a n
l o s
r e q u e r i m i e n t o s
d e
i n t e r p r e t a c i ó n .
S e
E e n e n
materiales
control
y
programas
integrados
para
los
principales
interferentes.
L o s
m é t o d o s
d e
c o m p a r a c i ó n
designados
han
sido
IE-‐HPLC:
Pico
Goldstein
(1986)
Bio-‐Rex
70
(1996)
Diamat,
Bio-‐Rad
(2002)
HPLC
de
intercambio
iónico.
34
cerEficados
en
el
2013.
Se
basa
en
la
interacción
diferencial
de
las
disEntas
fracciones
de
hemoglobina
con
grupos
aniónicos
inmovilizados
en
un
soporte
inerte.
Muestra
con
la
mezcla
de
hemoglobinas
Cartucho
con
resina
aniónica
Tiempos
de
corrida
cortos,
sin
afectación
de
la
resolución
de
la
separación
ni
la
precisión.
Cuando se elige IE-HPLC, es necesario inspeccionar bien los cromatogramas y si hay picos aberrantes y hay inconsistencias con relación al cuadro clínico es necesario ampliar la investigación. La coelución de la variante de Hb con la HbA0 = subesEmación de la HbA1c. La coelución de la variante de Hb con HbA1c = sobresEmación de la HbA1c. Elevación falsa de HbA1c: üHb carbamilada (Saudek et at, JAMA. 2006;295:1688-‐97). üHbS (LiTle et at, J Diabetes Sci Technol. 2009;3(3):446-‐451, en el sistema HA8140 (fue subsanado en el 8160).
Otras variantes provocan también la falsa disminución de HbA1c en
HPLC por intercambio catiónico
üHb Takamatsu
(β120Lys Gln) Hb G-Szuhu
(β80Asn Lys)
Moriwaki
et
al,
J
Clin
Pathol.
2003;53:854-‐857
(HA8110,
Rango
Ref
4.0%
a
5.4%,
%CV
=
0.2%)
Más
que
debilidad,
es
una
fortaleza:
el
HPLC
puede
ser
de
uMlidad
para
detectar
hemoglobinopaPas
silentes!
Nasir et al, Int J Diabet Dev C Tries. 2010;30(2): 86-90.Ventajas de la medición de HbA1c por HPLC ü Buena especificidad, con resultados rápidos de un volumen importante de pruebas, con instrumentos robustos, de alta eficiencia (automatizados). ü Excelente desempeño analítico con resultados altamente precisos y reproducibles, aún en muestras almacenadas en congelación (-70°C, hasta por 18 días, se presentan cambios, pero mínimos y sistemáticos (
Ventajas de la medición de HbA1c por HPLC
ü En muchos sistemas no se alteran los resultados
por las hemoglobinas inestables ni por la
hemoglobina carbamilada.
Nasir et al, Int J Diabet Dev C Tries. 2010;30(2): 86-90.
“Para
idenEficar
variantes
de
hemoglobinas
es
recomendable
usar
HPLC
o
espectrometría
de
masas”:
Recomendaciones
para
el
monitoreo
clínico
de
la
diabetes
mellitus.InternaMonal
Diabetes
FederaMon,
2012.
Clinic
guidelines
t a s k
f o r c e .
G l o b a l
g u i d e l i n e
f o r
t y p e
2
d i a b e t e s .
hlp://www.idf.org/sites/default/files/IDF-‐Guideline-‐for-‐Type-‐2-‐
Diabetes.pdf
)(Accesed,
October
2013).
Ventajas de la medición de HbA1c por HPLC ü Con los esquemas anteriores, la HbF co-eluía con la HbA1c, pero con las condiciones analíticas actuales, los métodos de II separan la HbF (pico bien definido), de manera que se puede estimar su elevación (Littleet al, J Diabetes Sci Technol. 2009;3(3):446–451.) üSe cuenta con calibradores para cumplir con los acuerdos internacionales y los sistemas HPLC más recientes tienen muy buena linearidad (Bio-Rad, Tosoh, HA-8160): Linearidad entre 4-19%, usando Lyphochek HbA1c Linearity Set (Bio-Rad). ü No hay interferencia por Hb carbamilada (León-Justel et al, Clin Biochem. 2009;42:1582–1584.).
Ventajas de la medición de HbA1c por HPLC
Imprecisión analítica (CV)
Roche INTEGRA 700 2.56
Roche INTEGRA 400 2.29
Dade Dimension RxL 2.25
Tosoh 2.2+ 1.66
Tosoh G7 1.14 (Truan
et
al,
J
Diab
Sci
Technol.
1998:50(2):163-‐170).
Variant
II
1.10
ü Los sistemas HPLC más recientes tienen una
precisión intraensayo muy alta (CV < 1%), con
precisión interensayo con CVVentajas de la medición de HbA1c por HPLC
üLa HbF afecta significativamente al sistema G7-
Tosoh (reduccción del 1.9% que parece haber sido
resuelta en el 2013), pero no al Variant-II-Turbo
(disminución de 0.2% desde el 2009).
üSe cuenta con materiales controles para detectar
las hemoglobinas variantes. Por ejemplo:
Lyphochek haemoglobin A2 Control Hb 35% (Bio-
Rad Laboratories)
León-Justel et al, Clin Biochem. 2009;42:1582–1584.
www.ngsp.org
Limitaciones de la medición de HbA1c por
HPLC
üLa mayoría de las hemoglobinas variantes
pueden separarse e identificarse, pero hay
problemas ocasionales con aquellas pobremente
caracterizadas.
üEl HPLC es un instrumento de uso exclusivo, no
es un analizador para múltiples propósitos.
León-Justel et al, Clin Biochem. 2009;42:1582–1584.Interferencia
de
los
métodos
para
medir
la
HbA1c
(en
el
rango
de
6-‐9%),
por
las
hemoglobinas
variantes
S,C,D
y
E
(heterocigotos)
y
por
la
elevación
de
la
HbF
Empresa
Método
Interferencia
por
HbAS
HbAC
HbAE
HbAD
↑HbF
Inmunoensayo
Abbol
Architecture/Aeroset
↑
↑
>10%
Bayer
A1cNOW
↑
↑
No
No
Beckman
Synchron
System
No
No
No
No
Ortho-‐Clinical
Vitros
No
No
No
No
Point
ScienMfic
HbA1c
on
modular
P
No
No
No
No
Roche
Cobas
Integra
↑
↑
Roche
Cobas
Integra
Gen.2
(Tina
Quant)
No
No
No
No
Roche/Hitachi
Hitachi
(Tina
Quant)
No
No
No
No
Siemens
Advia
(Nueva
versión)
No
No
Siemens
DCA
2000/Vantage
No
No
No
No
↑
Si
la
HbF
>10%
www.ngsp.org
Empresa
Método
Interferencia
por
HPLC
por
Intercambio
Iónico
HbAS
HbAC
HbAE
HbAD
↑HbF
Bio-‐Rad
D-‐10
(Short)
No
No
No
No
>10%
Bio-‐Rad
D-‐10
(extended)
No
No
No
No
Bio-‐Rad
Variant
A1c
No
No
No
↓
Bio-‐Rad
Variant
II
NU
No
No
No
Bio-‐Rad
Variant
II
Turbo
2
No
No
No*
No
Arkray-‐Menarini
HA8180V
No
No
No
Menarini
HA8160
(diabetes
mode)
No
No
↓
↓
Menarini
HA8160
(TP
mode)
No
No
No
Tosoh
G7
↓
No
↓
No
NO*
Tosoh
G8
No
No
↓
No
Afinidad
por
Boronato
Trinity
(primus)
Boronate
affinity
HPLC
No
No
No
No
↓
Si
HbF
>15%
EnzimáMco
Diazyme
Direct
enzymaMc
A1c
No
No
No
No
www.ngsp.org
Al
2013,
hay
34
HPLC
de
intercambio
iónico
cerEficados
por
el
NGSP
Bio-‐Rad
8
Arkray
11
Tosoh
10
Drew
1
Jiagsu
1
Meranini
2
Shangai
H.
1
¡Gracias por su atención!
HPLC de Bio-‐Rad cerEficados (marzo, 2013): Variant II dual A2/F/A1c Variant II dual A1c Variant II HbA1 NU D-‐10 dual A2/F/A1c D-‐10 A1c Variant II Turbo A1c Variant II Turbo Link HbA1c Variant II Turbo Hba1c Kit-‐20 hlp://www.ngsp.org
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